譯后修飾(post-translational modifications,PTM)是指蛋白質(zhì)在翻譯后經(jīng)歷的一種共價(jià)加工過(guò)程,通過(guò)在一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基上添加修飾基團,或通過(guò)蛋白質(zhì)水解去除特定基團,從而改變蛋白質(zhì)的性質(zhì)。PTM類(lèi)型包括經(jīng)典的磷酸化(phosphorylation)、甲基化修飾(methylation)、 棕櫚?;╬almitoylation),以及新近發(fā)現的乙?;╝cetylation)、丙二?;╩alonylation)、琥珀?;╯uccinylation)、乳酸?;╨actylation)和糖基化(glycosylation)等。修飾性抗體因其能夠特異性識別被修飾的氨基酸位點(diǎn),廣泛用于對相關(guān)蛋白質(zhì)的定性和定量分析,是科研人員研究PTM在重要生命過(guò)程(如轉錄、重組、復制、DNA修復和基因組結構的調節)中的功能和作用時(shí)不可或缺的試劑。
修飾性抗體類(lèi)型
磷酸化及磷酸化抗體
磷酸化修飾是指在細胞內蛋白質(zhì)氨基酸上添加磷酸基團的過(guò)程。20世紀50年代,Edmond Henri Fischer 和 Edwin Krebs 發(fā)現了第一個(gè)蛋白激酶,即環(huán)腺苷酸依賴(lài)性蛋白激酶(cyclic-AMP dependent protein kinase, PKA),并首次提出了蛋白質(zhì)可逆磷酸化修飾作為一種生物調節機制存在的概念。蛋白質(zhì)磷酸化修飾是一個(gè)由激酶和磷酸酶共同參與的動(dòng)態(tài)調節過(guò)程。激酶負責催化蛋白質(zhì)的磷酸化,將三磷酸腺苷(ATP)末端(γ位)的磷酸基團轉移到底物蛋白的特定氨基酸上,從而進(jìn)行共價(jià)修飾。磷酸酶則通過(guò)水解反應催化已發(fā)生磷酸化修飾的氨基酸去磷酸化,將磷酸單酯水解為一個(gè)磷酸基團和一個(gè)游離羥基,以去除磷酸基團。了解磷酸化修飾的機制和功能對于研究細胞信號傳導和生物調節至關(guān)重要。
磷酸化抗體能夠特異性識別特定的磷酸化位點(diǎn),從而檢測蛋白在細胞受到刺激時(shí)磷酸化水平的增強或減弱。這些抗體反映了蛋白功能狀態(tài)的變化,適用于磷酸化蛋白的定性和定量分析。磷酸化抗體在免疫學(xué)、生物化學(xué)、腫瘤學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)中得到了廣泛應用,尤其在細胞信號傳導、細胞凋亡和癌癥等生命科學(xué)研究領(lǐng)域中起著(zhù)重要作用。
甲基化及甲基化抗體
蛋白質(zhì)甲基化是由甲基化酶催化作用于蛋白質(zhì)特定殘基的一種重要動(dòng)態(tài)修飾和生物學(xué)現象,參與調控蛋白質(zhì)信號通路。常見(jiàn)的甲基化修飾包括DNA甲基化、RNA甲基化和組蛋白甲基化。由于甲基化修飾在細胞信號傳導、基因功能和遺傳改變中起著(zhù)重要作用,甲基化特異性抗體的制備顯得尤為重要。甲基化抗體能夠特異性識別特定的甲基化氨基酸位點(diǎn),用于區分蛋白質(zhì)的甲基化和非甲基化形式。它們可以對甲基化蛋白質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析,廣泛應用于免疫學(xué)、生物化學(xué)、腫瘤學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)等生命科學(xué)研究領(lǐng)域。
乙?;耙阴;贵w
蛋白質(zhì)乙?;亲畛R?jiàn)的?;揎楊?lèi)型之一,最早由Allfrey等人在1963年于組蛋白上首次發(fā)現。根據乙?;揎棸l(fā)生的位置不同,乙?;揎椏梢苑譃槿N類(lèi)型:Nα-乙?;?、Nε-乙?;蚈-乙?;?。這些修飾在調控蛋白質(zhì)功能和細胞過(guò)程方面具有重要作用。
乙?;贵w能特異性識別靶蛋白的乙?;问郊疤囟ㄒ阴;被嵛稽c(diǎn),檢測該蛋白質(zhì)的活性水平,用于區分蛋白質(zhì)乙?;头且阴;拇嬖谛问?,對乙?;鞍走M(jìn)行定性、定量分析,在細胞周期的調控、信號轉導、神經(jīng)退行性疾病、代謝疾病、癌癥的發(fā)生發(fā)展等生命科學(xué)研究中應用廣泛。
修飾性抗體制備服務(wù)普健生物提供的一站式修飾性抗體制備服務(wù),包括多肽的設計與合成、多肽偶聯(lián)、動(dòng)物免疫、抗體純化和QC檢測等。普健生物在修飾性抗體定制開(kāi)發(fā)方面具有豐富的經(jīng)驗,可提供磷酸化磷酸化抗體、甲基化抗體、乙?;贵w的多克隆抗體服務(wù)和單克隆抗體服務(wù)。
服務(wù)周期
6-8周
服務(wù)內容
修飾性多肽設計與合成:根據客戶(hù)提供的抗原蛋白序列和修飾位點(diǎn)免費進(jìn)行抗原設計,依照客戶(hù)需求合成修飾性多肽和非修飾性多肽
動(dòng)物免疫:多肽抗原將被用來(lái)免疫動(dòng)物(大鼠/小鼠/兔)并激發(fā)其產(chǎn)生針對特定抗原的抗體??商峁┌ㄍ?、小鼠、大鼠、豚鼠、羊、雞的多克隆抗體定制服務(wù)以及大鼠、小鼠的單克隆抗體定制服務(wù)。
血清效價(jià)檢測:檢測第三次免疫、第四次免疫后的效價(jià),免疫血清效價(jià)>1:128000
抗體純化:使用修飾性與非修飾性多肽兩輪親和純化
抗體驗證:WB和IF、流式驗證純化后抗體,也可根據需求提供SDS-PAGE、ELISA鑒定
交付內容
多肽、未純化抗血清小樣、純化獲得的抗體(多抗)或大鼠、小鼠單克隆抗體(單抗)、singleB免單抗(序列)、1-3株單克隆細胞株、技術(shù)服務(wù)報告等。
最終交付的抗體經(jīng)過(guò)多重檢測驗證,確??商禺愋宰R別磷酸化(phosphorylated)/甲基化(methylated)/乙?;╝cetylated)的氨基酸位點(diǎn)。普健生物還可以按客戶(hù)實(shí)際應用要求制定個(gè)性化免疫、篩選及檢測方案,以滿(mǎn)足客戶(hù)驗證要求。
普健生物協(xié)助客戶(hù)發(fā)表文獻展示
2024年1月,中國農業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫研究所與中國科學(xué)院武漢病毒研究所合作,在《Journal of Cell Biology》上發(fā)表了題為“BLK positively regulates TLR/IL-1R signaling by catalyzing TOLLIP phosphorylation”的研究論文。研究發(fā)現,酪氨酸激酶BLK催化TOLLIP在Y76、Y86和Y152位點(diǎn)磷酸化,引發(fā)下游炎癥信號級聯(lián)反應。文中使用的磷酸化抗體p-TOLLIP-Y86由普健生物定制提供(詳情見(jiàn)下圖)。