噬菌體展示技術(shù)抗體發(fā)現平臺

噬菌體展示抗體技術(shù)將基因型和表型統一于一體，將選擇能力與擴增能力結合起來(lái)，具有強大的篩選能力，能夠在體外模擬體內的抗體生成過(guò)程，可以不經(jīng)雜交瘤途徑，甚至不經(jīng)過(guò)免疫就可以制備和生產(chǎn)單克隆抗體。

噬菌體展示技術(shù)的出現為全人重組抗體提供了一條簡(jiǎn)便、快捷的基因工程抗體制備路線(xiàn)，是全人重組抗體制備發(fā)展史上重要的轉折點(diǎn)。

近年來(lái)，單域抗體(SdAb)的關(guān)注度也非常高，單域抗體為駝類(lèi)和軟骨魚(yú)類(lèi)中天然存在的僅由兩條重鏈組成的特殊抗體，只包含一個(gè)重鏈可變區(VHH, Variable Domain of Heavy Chain Antibody)和兩個(gè)常規的CH2與CH3區。單域抗體通過(guò)重鏈上的一個(gè)可變區(VHH)結合抗原，該可變區可以單獨穩定地在體外存在，被稱(chēng)為駝類(lèi)單域抗體(SdAb)或者納米抗體(nanobody)。納米抗體晶體寬為2.5nm，長(cháng)4nm，分子量?jì)H為傳統完整抗體的1/10(約15kD)但依然具有完整的抗原識別能力，得益于納米抗體微小的結構、完整的抗原識別能力以及噬菌體篩選技術(shù)，納米抗體表現出高親和力、高特異性、強穿透性和易于改造和表達等特點(diǎn)，并且由于可以獲得抗體完整序列，納米抗體可以通過(guò)體外重組表達高質(zhì)量穩定生產(chǎn)，有效避免傳統抗體的批次間差異問(wèn)題。

納米抗體特點(diǎn)

1.有更長(cháng)的CDR3區(納米抗體CDR3通常由16~24個(gè)氨基酸組成，傳統單抗CDR3僅有7~12個(gè)氨基酸 )，與抗原特異性結合能力更強

2.結構簡(jiǎn)單，易于基因工程改造

3.制備簡(jiǎn)單，易于工業(yè)化放大生產(chǎn)

4.易于人源化

噬菌體抗體庫的分類(lèi)

抗體庫是編碼特性未知抗體的抗體基因的巨大集合(通常大于10¹⁰)?？贵w庫是通過(guò)噬菌體展示和其他體外選擇技術(shù)來(lái)發(fā)現抗體的重要來(lái)源，其設計是成功發(fā)現抗體的關(guān)鍵。

隨機肽庫：將化學(xué)合成的隨機寡核苷酸序列與噬菌體的表面蛋白基因融合，在噬菌體表面表達出各種氨基酸組合的隨機序列短肽。利用噬菌體展示隨機肽庫可以高通量篩選各種抗原的抗原表位

免疫庫：免疫庫由經(jīng)過(guò)免疫 ( 包括疫苗注射、微生物感染、自身免疫疾病、腫瘤等 ) 后的供體B淋巴細胞的抗體基因構建。對于特定免疫抗原的抗體淘選的效率較高，但一般僅適用于一種特異性抗體的選擇，庫容量要求不高，一般10⁶-10⁸的庫容量就可滿(mǎn)足需要

天然庫：采用不經(jīng)免疫的人或動(dòng)物來(lái)源的外周血淋巴細胞、骨髓、脾細胞的B細胞作為材料，進(jìn)行基因擴增，但親和力通常較低。骨髓內和骨髓外所有抗體基因都包含在內，所構建的抗體庫適用于所有抗原所對應的抗體的選擇，庫容量要求較高，最小需要達到10⁹，因為目前估算的自然界的抗原種類(lèi)在這個(gè)數量級上

1.豐富的噬菌體抗體技術(shù)經(jīng)驗，5年以上噬菌體抗體開(kāi)發(fā)，交付上百個(gè)噬菌體展示抗體開(kāi)發(fā)項目

2.具有全人源重組抗體庫，庫容高達千億級別(10¹¹ pfu)，兩步建庫法，保證了文庫的多樣性，抗體庫片段插入正確率高;可以?xún)芍苣玫饺嗽粗亟M抗體

3.可以構建多物種(人源、小鼠、兔子、羊駝等)抗體文庫

4.可以構建多種類(lèi)型(scfv、Fab、VHH 等)的抗體文庫

服務(wù)流程

根據文庫中數百個(gè)隨機抗體序列分析，其CDR3長(cháng)度基本符合正態(tài)分布，跟文獻中報道的自然VHH抗體CDR3長(cháng)度分布相符。

挑選背景值較低的抗體蛋白進(jìn)行親和力測定，結果如下：