聯(lián)系我們
單B細胞抗體制備技術(shù)是一種新興且高效的單克隆抗體開(kāi)發(fā)技術(shù)，基于每個(gè)B細胞僅含有一對功能性重鏈和輕鏈、并產(chǎn)生一種特異性抗體的特性，能夠直接從單個(gè)B細胞中擴增抗體基因。該技術(shù)具有速度快、通量高、天然保留抗體重輕鏈的配對等優(yōu)勢，能夠快速獲得高特異性和高親和力的抗體。在病原感染、腫瘤、自身免疫性疾病等領(lǐng)域有廣泛應用前景，是一種高效的抗體篩選與開(kāi)發(fā)方法。
抗N6特異性單克隆抗體
H5N6是一種甲型流感病毒的亞型，最早于2013年在家禽中被發(fā)現，隨后傳播到野生鳥(niǎo)類(lèi)和家禽群體中。人類(lèi)可以通過(guò)與感染鳥(niǎo)類(lèi)或污染表面接觸感染該病毒，病毒可通過(guò)眼睛、鼻子、口腔或吸入的方式傳播。自2014年以來(lái)，至少有94例人類(lèi)感染病例，37人死亡。2021年出現了人類(lèi)感染病例的激增，尚未發(fā)現人傳人的證據。
單克隆抗體作為靶向治療藥物，因其特異性強、療效顯著(zhù)、毒性低，被譽(yù)為“生物導彈”，廣泛應用于多種疾病的治療，如靶向CD20的利妥昔單抗和靶向HER2的曲妥珠單抗已在臨床使用超過(guò)20年。在應對病毒性傳染病上，具有中和作用的單克隆抗體可以特異性中和病毒，阻止其進(jìn)入細胞并增殖，既可用于高危人群的短期預防，也可用于感染后的治療，因此在禽流感的預防和治療中具有重要應用前景。
2024年10月15日星期二，國際權威期刊《Nature Communications》在線(xiàn)發(fā)表了中國科學(xué)院微生物研究所和深圳市第三人民醫院的聯(lián)合科研論文。研究報道了一個(gè)全人源的單克隆抗體18_14D，該單抗特異性靶向H5N6禽流感的神經(jīng)酰胺酶(N6)，能夠有效保護小鼠免受H5N6禽流感病毒感染。
研究人員從感染H5N6禽流感病毒的康復患者血清中分離出外周血單核細胞（PBMC），并通過(guò)流式細胞術(shù)分離得到表達N6特異性IgG的記憶B細胞。隨后，經(jīng)過(guò)B細胞測序和表達，成功獲得了抗N6特異性單克隆抗體。
01
體外實(shí)驗
研究人員利用生物膜干涉技術(shù)（BLI）測定了18_14D Fab對H5N6禽流感病毒神經(jīng)氨酸酶（N6）頭結構域四聚體和單體的親和力，分別為26 nM和18 nM。然而，18_14D并不能抑制H5N6禽流感病毒的復制。細胞實(shí)驗顯示，18_14D對人類(lèi)和小鼠的Jurkat細胞具有較強的抗體依賴(lài)的細胞介導的細胞毒性（ADCC）活性。
圖1. 體外實(shí)驗顯示，18_14D對N6有強親和力和較高ADCC活性，但是沒(méi)有病毒抑制活性
02
體內實(shí)驗
研究人員在小鼠模型中進(jìn)一步研究了18_14D IgG對H5N6禽流感病毒的預防和治療效果。在使用20 mg/kg劑量進(jìn)行預防性治療時(shí)，所有6只小鼠均存活；而在5 mg/kg和1 mg/kg劑量下，分別有5只小鼠存活。感染后48小時(shí)給予18_14D進(jìn)行治療，結果顯示該抗體提供了部分保護，在5 mg/kg和20 mg/kg組中，分別有1只和3只小鼠存活。進(jìn)一步研究發(fā)現，18_14D LALA變體使小鼠體重明顯下降，僅有3只小鼠存活。結果表明，18_14D主要通過(guò)抗體依賴(lài)的細胞介導的細胞毒性（ADCC）功能保護小鼠免受H5N6病毒感染。
圖2. 小鼠體內攻毒實(shí)驗顯示，18_14D依靠ADCC活性對小鼠預防和治療起作用
該研究為H5N6禽流感的治療和預防提供了一個(gè)有希望的新方法，開(kāi)發(fā)的單克隆抗體18_14D顯示了通過(guò)抗體依賴(lài)的細胞介導的細胞毒性（ADCC）機制來(lái)保護小鼠免受H5N6感染的潛力。這項工作進(jìn)一步證明了單B細胞抗體制備技術(shù)在高效開(kāi)發(fā)針對特定病原體的抗體方面的巨大優(yōu)勢。
