噬菌體展示技術(shù)是一種基于定向化技術(shù)的高通量篩選技術(shù),它能在極大程度上定向技術(shù)在抗體多肽的改造和篩選方面的應用,實(shí)現外源肽或蛋白基因與噬菌體上特定蛋白融合表達的新技術(shù)。隨著(zhù)噬菌體展示技術(shù)的不斷發(fā)展,其優(yōu)勢得到了廣泛的認知,在實(shí)驗室中的使用也愈發(fā)的頻繁。
那么,什么是噬菌體展示技術(shù)呢?
就理論而言,噬菌體展示相對來(lái)說(shuō)非常的簡(jiǎn)單,就是通過(guò)將外源肽段和噬菌體的衣殼蛋白融合展示與噬菌體表面,然后通過(guò)篩選及富集等一系列的技術(shù),提取出我們所需要的蛋白產(chǎn)品。而且噬菌體展示技術(shù)能夠實(shí)現對人和其他動(dòng)物的B細胞抗體庫進(jìn)行體外篩選,能夠很好地避開(kāi)免疫和細胞融合等步驟,在極大程度上縮短了實(shí)驗的周期,并且增加了其穩定性。因為噬菌體展示技術(shù)具備篩選容量大、可發(fā)酵生產(chǎn)、操作簡(jiǎn)單等一系列的優(yōu)勢,使得它在之后的使用中變得越發(fā)的廣泛。
噬菌體展示技術(shù)的優(yōu)勢體現在哪些方面?
1、固相和液相噬菌體展示文庫篩選經(jīng)驗豐富,可自動(dòng)化進(jìn)行噬菌體展示高通量篩選,實(shí)現快速交付;
2、高達1010以上的天然抗體文庫庫容以及107以上的免疫抗體文庫庫容;
3、通過(guò)先進(jìn)的親和力檢測技術(shù),可以深入地檢測其生物信息,從而選擇出最佳的人源框架區序列,快速且高通量地篩選出高親和力、高產(chǎn)量的人源化抗體
4、片段插入率高,可達90%以上;
噬菌體抗體庫構建:
1、噬菌體展示技術(shù)的使用流程
2、隨機多肽/蛋白多肽核酸序列合成
3、組織RNA抽提及cDNA制備目的基因/抗體基因克隆基因插入載體電轉大腸桿菌抗體庫庫容及多樣性檢測
抗體庫篩選:
靶分子暴露靶分子與噬菌體結合洗脫擴增得到篩選到的基因及表達產(chǎn)物。
總的來(lái)說(shuō),噬菌體展示技術(shù)能夠帶來(lái)很多傳統蛋白表達方式所無(wú)法達到的效果,而且因為其優(yōu)勢,使得其在生產(chǎn)一些蛋白的時(shí)候,能減少中間過(guò)程,降低其生產(chǎn)周期。隨著(zhù)噬菌體展示技術(shù)的不斷提升,相信未來(lái)會(huì )有更多更迅速的方法產(chǎn)生蛋白。