聯(lián)系我們
近年來(lái)，基于基因工程原理發(fā)展起來(lái)的報告基因技術(shù)逐漸成為最具有發(fā)展潛力基因分析工具之一。
報告基因
報告基因是一類(lèi)編碼可供檢測的酶與蛋白的基因，是現代分子生物學(xué)研究領(lǐng)域中用于分析基因轉錄和調控的一種便捷工具，可用來(lái)分析結構基因旁側區域潛在的順式元件（如啟動(dòng)子、增強子和沉默子等）和反式作用因子間的相互作用關(guān)系。
啟動(dòng)子是真核基因轉錄起始位點(diǎn)上游一段長(cháng)度不等的特異性序列，該片段有多種調節因子的結合位點(diǎn)，能順式調控基因的轉錄，因此可以通過(guò)檢測啟動(dòng)子的激活程度間接定量蛋白(如Ⅰ型干擾素)的表達量。
作為報告基因的條件：
編碼產(chǎn)物的活性不受宿主細胞的干預；
編碼產(chǎn)物在宿主細胞本身不存在，易區分；
編碼產(chǎn)物的活性測定必須快速、簡(jiǎn)便、靈敏度高、重復性好。
常用的報告基因：
氯霉素乙酰轉移酶基因（CAT）、β-gal、熒光素酶基因（Luc）
報告基因的應用：
探討啟動(dòng)子作用，細胞信號轉導，基因轉錄調節，作為分子標記，生物大分子間的相互作用，RNA干擾研究，影像技術(shù)，藥物篩選等
在如今發(fā)展起來(lái)的眾多報告基因中，熒光素酶報告基因以檢測快速、靈敏度高、線(xiàn)性范圍廣，且在大多數哺乳動(dòng)物細胞無(wú)內源性表達等諸多優(yōu)點(diǎn)而備受青睞。
雙熒光素酶報告基因系統
雙熒光素酶報告基因檢測系統采用螢火蟲(chóng)熒光素酶(Firefly Luciferase)和海腎熒光素酶(Rellina Luciferase)組成雙熒光素酶報告基因實(shí)驗系統（Dual-Luciferase Reporter Assay），可以較好地體現檢測結果的精確性。
實(shí)驗中螢火蟲(chóng)熒光素酶與基因表達的特定實(shí)驗條件相關(guān)，海腎熒光素酶用來(lái)做轉染的內參，以校正不同樣品之間轉染的轉染效率。螢火蟲(chóng)熒光素酶和海腎熒光素酶不需要翻譯后修飾即具有生物活性，一旦翻譯完成即具有報告基因的功能。通過(guò)加入特定的熒光素酶底物，熒光素酶與底物反應過(guò)程中會(huì )發(fā)出生物熒光，然后可以通過(guò)熒光測定儀測定反應過(guò)程中釋放的生物熒光。
與傳統的共報告基因（如 CAT，β-Gal，GUS）相比，雙熒光素酶報告基因系統更加靈敏，有望把可能削弱實(shí)驗準確性的內在因素（如培養細胞的數目和健康狀況的差別、細胞轉染和裂解效率的差別等）的變化降到最小，而且報告基因的檢測極為快速(30s內完成測試)、簡(jiǎn)便。
?
雙熒光素酶報告基因檢測設計圖及原理圖示
普健生物雙熒光素酶報告基因檢測服務(wù)
1. 序列分析。
2. 相關(guān)載體亞克隆。
3. 細胞培養及報告基因質(zhì)粒、轉錄因子的共轉染。
4. 熒光素酶活性檢測。
5. 實(shí)驗報告。
客戶(hù)提交樣本要求：
客戶(hù)可以提供構建好的含目的調控元件的報告基因質(zhì)粒，并提供報告基因質(zhì)粒的全部相關(guān)信息。也可以提供目的調控元件序列及相關(guān)信息，由普健生物將其克隆到相應的報告基因質(zhì)粒上。
普健生物的優(yōu)勢：
-
擁有長(cháng)期的報告基因實(shí)驗分析經(jīng)驗，幫助你合理設計實(shí)驗；
-
高效轉染試劑、高靈敏度熒光素酶檢測試劑盒，確保結果的可靠性；
-
全面的技術(shù)服務(wù)，提供詳細的原始數據和實(shí)驗報告。
