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分類(lèi)：
瞬時(shí)轉染（transient gene expression, TGE）和穩定轉染(stable gene expression，SGE)兩種。
指外源 DNA或RNA 轉入宿主細胞后不整合到宿主染色體中進(jìn)行外源目的基因的表達。
特點(diǎn)：
1.目的基因未整合到染色體上，超螺旋質(zhì)粒DNA有較高的轉染效率；
2.轉染24h-72h后常需要用到一些報告系統如熒光蛋白、β半乳糖苷酶等來(lái)幫助檢測；
3.表達持續時(shí)間48-72h,隨細胞分裂而稀釋直至丟失；
4.用于快速分析:如基因產(chǎn)物短期表達、蛋白質(zhì)小規模表達純化。
指外源DNA轉入宿主細胞后將外源目的基因整合到宿主染色體中進(jìn)行表達。
特點(diǎn)：
圖1 細胞轉染流程圖
細胞轉染的方法
物理法：電穿孔法、顯微注射法和基因槍法；
化學(xué)法：磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉染方法、多種陽(yáng)離子物質(zhì)介導；
生物法：病毒介導轉染、逆轉錄病毒、腺病毒。
一些轉染方法方法的比較
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轉染 方法 |
原理 |
應用 |
特點(diǎn) |
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電穿孔法 |
高脈沖電壓破壞細胞膜點(diǎn)位，DNA通過(guò)膜上形成的小孔導入 |
瞬時(shí)轉染 所有細胞 |
胞用量大，需要根據不同細胞類(lèi)型優(yōu)化電穿孔實(shí)驗條件 |
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顯微注射法 |
用顯微操作將DNA直接注入靶細胞核 |
穩定轉染 瞬時(shí)轉染 |
轉染細胞數有限，多用于工程改造或轉基因動(dòng)物的胚胎細胞 |
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基因槍法 |
將DNA用顯微重金屬顆粒沉淀，再將包被好的顆粒用彈道裝置射入細胞，DNA在胞內逐步釋放表達 |
瞬時(shí)轉染 穩定轉染 |
用于人的表皮細胞，纖維原細胞，淋巴細胞及原代細胞 |
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磷酸鈣法 |
磷酸鈣DNA復合物吸附細胞膜被細胞內吞 |
穩定轉染 瞬時(shí)轉染 |
不適用于原代細胞，操作簡(jiǎn)便但重復性差，有些細胞不適用 |
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陽(yáng)離子脂質(zhì)體法 |
帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內吞 |
穩定轉染 瞬時(shí)轉染 所有細胞 |
實(shí)用性廣，轉染效率高，重復性好，但轉染時(shí)需要除血清。轉染效果隨細胞類(lèi)型變化大 |
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病毒介導法 |
通過(guò)侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中 |
穩定轉染 |
可用于難轉染的細胞、原代細胞，體內細胞等 |
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逆轉錄病毒 |
通過(guò)病毒中膜糖蛋白和宿主細胞表面的受體相互作用而進(jìn)入宿主細胞，之后反轉入酶啟動(dòng)合成DNA并隨機整合到宿主基因組中。 |
特定宿細胞 |
攜帶基因不能太大，細胞需要處于分裂期，需考慮安全因素 |
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腺病毒 |
通過(guò)侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中 |
瞬時(shí)轉染特定宿主細胞 |
可用于難轉染的細胞，需要考慮安全因素 |
圖2 細胞轉染的一些常見(jiàn)方法
穩定細胞株：一般是將外源DNA克隆到具有某種抗性或者選擇基因的載體上，載體被轉染到宿主細胞并整合到染色體中，用載體中所含的選擇標志進(jìn)行篩選，篩選得到可穩定表達目的蛋白的細胞株。
1. 基因過(guò)表達、突變、沉默等科研用穩轉細胞株構建；
2. 重組抗體，細胞因子等生物藥的穩轉細胞系前期篩選。
1. 重組表達質(zhì)粒構建（1周）
2. 藥物本底濃度測定（2周，可與1同時(shí)進(jìn)行）
3. 細胞轉染（1天）
4. 多克隆穩定細胞株篩選及鑒定（2-3周）
5. 單克隆穩定細胞株篩選及鑒定（3-4周）
6. 穩轉細胞株產(chǎn)量、活性檢測及穩定性研究（根據客戶(hù)需求）
圖3 技術(shù)流程圖
高質(zhì)：外源基因嚴格鑒定，細胞來(lái)源清晰，無(wú)污染
高產(chǎn)：重組蛋白/抗體表達量可快速優(yōu)化至2g/L以上穩定表達
穩定：獨有的GS穩轉系列載體配合MSX藥物篩選，實(shí)現穩定傳代15代以上
快速：篩選高產(chǎn)細胞株，周期短至3個(gè)月
靈活定制：可針對重組蛋白/抗體全長(cháng)或片段進(jìn)行個(gè)性化表達
經(jīng)驗豐富：專(zhuān)業(yè)的技術(shù)團隊，已成功為國內外多家醫藥公司和研究單位構建交付穩定細胞株
多篩選系統：G418/潮霉素/嘌呤霉素篩選系統，GS/DHFR 篩選孵化系統等
案例
穩轉優(yōu)化前表達量28mg/L；穩轉優(yōu)化后表達量2.3 g/L
