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歷經(jīng)40余年的發(fā)展，噬菌體展示技術(shù)日趨成熟，已然成為抗體發(fā)現技術(shù)的主流平臺之一。隨著(zhù)抗體工程的高速發(fā)展，抗體藥從鼠源到全人源的產(chǎn)業(yè)已成趨勢，科研人員對于抗體功能的改造、雙/多特異性抗體的研發(fā)需求更甚，對抗體篩選和優(yōu)化的技術(shù)要求也進(jìn)一步提高，噬菌體展示技術(shù)也在這個(gè)過(guò)程中也發(fā)揮越來(lái)越重要作用。
噬菌體展示抗體庫是目前發(fā)展最成熟、應用最為廣泛的基因工程抗體篩選技術(shù)，通過(guò)噬菌體展示技術(shù)使基因工程抗體以融合蛋白的形式展示在噬菌體外殼蛋白 gpⅢ或 gpⅧ的 N 端，從而將抗體的基因型和表型連接起來(lái)，用固相或液相化抗原與抗體庫孵育，經(jīng)「吸附—洗脫—擴增」數個(gè)循環(huán)使特異性克隆得以富集，因而具有簡(jiǎn)便、快速和高效的優(yōu)點(diǎn)。
噬菌體展示技術(shù)的優(yōu)勢
1. 方法簡(jiǎn)便快速、耗時(shí)少。從 mRNA 提取到抗體庫構建，繼而篩選出特異性抗體的陽(yáng)性克隆僅需幾周的時(shí)間。
2. 篩選容量大、效率高。噬菌體抗體庫中通常含有 106-109 個(gè)不同抗原結合特異性的抗體分子克隆，可以對百萬(wàn)乃至億萬(wàn)個(gè)分子進(jìn)行選擇，且每一輪「吸附-洗脫-擴增」可以使抗原特異性較強的克隆得到富集，非常容易從抗體庫中篩選到特異性抗體。
3. 易于在基因水平操作，蛋白質(zhì)表型與基因型統一?？梢愿鶕煌康摹鸽S心所欲」地改造抗體結構、進(jìn)行基因突變，制備各種新型抗體；另外，還可以將噬菌體抗體與一些功能性分子偶聯(lián)形成免疫毒素、酶標抗體等，進(jìn)一步拓寬了抗體的應用范圍。
4. 易于規?；a(chǎn)。
噬菌體展示技術(shù)流程
一般來(lái)說(shuō)，噬菌體展示技術(shù)有以下5個(gè)步驟:
步驟1:構建噬菌體展示庫
重組DNA技術(shù)用于將外來(lái)cDNA整合到病毒DNA中。不同的基因組被插入到多個(gè)噬菌體的基因組中。剪接到一個(gè)外殼蛋白的基因中，使該蛋白顯示在噬菌體顆粒的外面，而這些分離的噬菌體只展示一種蛋白、肽或抗體。這些噬菌體的集合即為庫，如抗體噬菌體庫、蛋白質(zhì)噬菌體庫或隨機噬菌體庫。
步驟2：結合
這些庫暴露于選定的目標，只有一些噬菌體會(huì )與目標相互作用。這些目標是計劃識別特定的配體，如固定的蛋白、細胞表面蛋白或組織細胞表面蛋白。
步驟3：洗滌
未結合的噬菌體可以被洗滌緩沖液沖走，只留下那些對受體有親和力的噬菌體。
步驟4：洗脫
洗脫緩沖液洗脫回收對目標有親和力的噬菌體
步驟5：放大
展示特異性的洗脫噬菌體被用來(lái)感染新的宿主細胞進(jìn)行擴增，或直接進(jìn)行細菌感染和擴增回收的噬菌體。
噬菌體展示技術(shù)由于其廣泛的應用領(lǐng)域備受關(guān)注，這就要求廣大從業(yè)者在熟悉，掌握噬菌體展示技術(shù)的同時(shí)，廣泛的開(kāi)展交流與學(xué)習，不斷地在應用噬菌體展示這一技術(shù)的同時(shí)取得新的突破。
