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單克隆抗體技術(shù)在生物醫學(xué)和免疫治療中發(fā)揮著(zhù)重要作用，極大地促進(jìn)了基因和蛋白質(zhì)結構和功能的研究。迄今為止，單克隆抗體經(jīng)歷了四個(gè)階段:鼠源單克隆抗體、嵌合單克隆抗體、人源化單克隆抗體和全人源單克隆抗體；成千上萬(wàn)的單克隆抗體已被應用于生物學(xué)和醫學(xué)領(lǐng)域，在疾病的發(fā)病機制、診斷和治療中發(fā)揮著(zhù)特殊的作用。本文將介紹單克隆抗體技術(shù)中B細胞單克隆抗體生成技術(shù)，并分析其在臨床醫學(xué)中的應用與前景。
腫瘤免疫是一種通過(guò)重新啟動(dòng)和維持腫瘤免疫周期以控制和清除腫瘤來(lái)恢復身體正?？鼓[瘤免疫反應的方法，這對臨床轉移性腫瘤有重大影響，改變了許多類(lèi)型腫瘤的護理標準?？贵w是機體在抗原刺激下，由B淋巴細胞或記憶細胞衍生的漿細胞產(chǎn)生的特異性結合免疫球蛋白，是機體不可缺少的組成部分。其功能是與抗原結合，有效去除外來(lái)物，如入侵的微生物和寄生蟲(chóng)等。
抗體一般分為多克隆抗體和單克隆抗體。多克隆抗體是機體受到多種抗原決定因子刺激后，由多個(gè)B細胞克隆產(chǎn)生的，可以看作是多個(gè)單克隆抗體的混合物；單克隆抗體是可以靶向特定抗原決定簇的抗體，具有高特異性、強結合力、高純度、低成本和大規模生產(chǎn)的特點(diǎn)。迄今為止，單克隆抗體經(jīng)歷了不同的優(yōu)化和發(fā)展階段，包括小鼠單克隆抗體、人源單克隆抗體和全人單克隆抗體。
人源單抗是指通過(guò)基因克隆和DNA重組重建的小鼠單抗。該構建形成了mAb的恒定部分(CH和CL區域)或人抗體基因編碼的mAb的所有部分，從而基本保留了原始鼠單抗的親和力和特異性，降低了其異質(zhì)性。作為應用最廣泛的單克隆抗體，人源化單克隆抗體的優(yōu)勢在于可以克服人抗鼠抗體反應，防止單克隆抗體作為外源蛋白被免疫系統快速清除，提高單克隆抗體的生物活性。目前，雜交瘤技術(shù)、噬菌體展示技術(shù)、核糖體展示技術(shù)、轉基因小鼠技術(shù)、B細胞單克隆抗體生成技術(shù)等均可制備完全的人單抗。
單B細胞單克隆抗體技術(shù)的發(fā)展
早在2003年，Wardemann等人就利用從骨髓中分離的早期人類(lèi)B細胞前體制備了自身反應性抗體，以檢測自身反應性B細胞的結構、分化和沉默。2004年，Traggiai等人用EBV使分離的人記憶B細胞永生，并篩選出35種抗流感病毒的單克隆抗體，這使得記憶B細胞產(chǎn)生單克隆抗體成為可能。此后，單克隆B細胞生成單克隆抗體技術(shù)逐漸應用于各種實(shí)驗研究，作為現代生命科學(xué)研究的重要工具，為生命科學(xué)多個(gè)領(lǐng)域的發(fā)展做出了巨大貢獻。
近年來(lái)，隨著(zhù)分子細胞生物學(xué)的發(fā)展，單B細胞抗體制備技術(shù)開(kāi)始興起并逐漸得到廣泛應用。這是因為單B細胞抗體技術(shù)制備的單克隆抗體具有全人源性、高特異性和統一性的特點(diǎn)，在病原微生物感染、腫瘤、自身免疫性疾病和器官移植等方面具有獨特的優(yōu)勢和良好的應用前景。
與其他單抗制備技術(shù)相比，單克隆B細胞技術(shù)是一種體外克隆和表達具有單一抗原特異性的B細胞抗體的技術(shù)，該技術(shù)保留了輕重鏈V區自然配對，具有基因多樣性好、效率高、充分人源化和所需細胞數量少的優(yōu)點(diǎn)。研究表明，人類(lèi)記憶B細胞可以在人體內存活50年以上，提供了宿主大部分時(shí)間內產(chǎn)生的特定抗體的歷史記錄。相比之下，在大多數傳統方法中使用的體液中的抗體在大球蛋白清除后通常會(huì )衰減，這意味著(zhù)人們在幾年內就會(huì )失去保護性抗體。此外，有人提出病毒感染患者血液中的記憶B細胞可能存儲患者早期感染該病毒的基因記錄，這為單克隆抗體的研究和開(kāi)發(fā)提供了新的方向。
隨著(zhù)B細胞分選技術(shù)的成熟和完善，以及PCR基因擴增方法和抗體基因的高通量分析鑒定，B細胞抗體制備技術(shù)將在診斷、藥效學(xué)和臨床應用中發(fā)揮前所未有的重要作用，開(kāi)創(chuàng )抗體研究的新時(shí)代。由于這種方法也成功地廣泛分離了針對SARS和H5N1流感病毒的中和抗體，它不僅可以為被動(dòng)血清治療提供中和抗體，而且還可以為疫苗設計提供信息，并有望加速傳染病領(lǐng)域治療方法的發(fā)展。
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