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自1975年Kohler和Milstein首次描述通過(guò)雜交瘤技術(shù)產(chǎn)生單克隆抗體(mab)的方法以來(lái)，單克隆抗體已成為必不可少的研究試劑和非常成功的治療分子。由于疾病靶標在物種間的高序列保守性(使免疫變得困難)、受限的解剖位置(例如中樞神經(jīng)系統)、難以純化可溶性形式(例如gpcr)以及有時(shí)需要靶向疾病狀態(tài)特異性的瞬時(shí)或不穩定構象，因此通過(guò)抗體干預來(lái)調節疾病靶標變得更具挑戰性。
盡管雜交瘤方法已經(jīng)徹底改變了單克隆抗體的使用，但由于依賴(lài)于融合事件，該技術(shù)相對低效。噬菌體展示技術(shù)也被廣泛用作生產(chǎn)單克隆抗體的技術(shù)。然而，在文庫構建過(guò)程中發(fā)生的抗體可變區基因的隨機組合導致天然同源重鏈和輕鏈配對的丟失，而這些重鏈和輕鏈配對是在體內免疫應答過(guò)程中進(jìn)化和選擇的。由于這種隨機配對，來(lái)自抗體文庫的抗體通常需要體外成熟，以在作為治療分子進(jìn)展之前賦予增加的親和力和穩定性。
近年來(lái)單B細胞技術(shù)獲得了許多科學(xué)家的青睞，單B細胞技術(shù)平臺保留了自然的重鏈和輕鏈配對，避免了低效的雜交瘤融合步驟，從而能夠有效地挖掘免疫B細胞群。這有助于發(fā)現罕見(jiàn)的抗體，這些抗體可能具有獨特的高度理想的特性，以及產(chǎn)生大量不同的抗體。在克隆抗體基因的過(guò)程中，保留天然的重鏈和輕鏈配對有利于產(chǎn)生具有吸引力的親和力、特異性和穩定性的重組抗體。
流式細胞術(shù)已被用于從免疫、接種疫苗或感染后7天的獻血者血液中分離出單個(gè)漿母細胞。在此期間，質(zhì)母細胞短暫地出現在外周，并提供豐富的抗原特異性B細胞群供選擇。然而，分選不包括抗原結合步驟，盡管群體豐富，但從這些漿質(zhì)母細胞中回收抗原特異性重組抗體的比例可低至10%。
在相關(guān)的文獻研究中，除了Manz等人以及最近的Carroll和al - rubeai[20]和Taddeo等人的研究外，流式細胞術(shù)尚未常規應用于抗原反應性IgG分泌細胞的鑒定。這主要是由于缺乏表面免疫球蛋白，排除了用靶抗原染色特定細胞的選擇。然而，FACS已被成功用于鑒定抗原特異性記憶B細胞，表達表面IgG作為B細胞受體的一部分。Weitkamp等(2003)利用熒光病毒樣顆粒(VLPs)在96孔板上鑒定并將輪狀病毒特異性的人單B細胞分選到單孔中，然后進(jìn)行培養，誘導抗體分泌。Amanna和Slifka設計了一種FACS方法，用于臨床樣本中破傷風(fēng)和白喉抗原特異性記憶B細胞的鑒定和定量。然而，他們沒(méi)有將其擴展到單細胞分選和進(jìn)一步分析。di Niro等人描述了輪狀病毒特異性B細胞分選后立即進(jìn)行單細胞RT-PCR。
普健生物（我們）建立了噬菌體展示抗體文庫技術(shù)平臺以及新型的 Xten™ Mab Single B 兔單克隆抗體開(kāi)發(fā)技術(shù)平臺。利用B細胞分選富集策略，在流式分選設備的支持下，有效富集抗原特異性B細胞，提高B細胞體外培養的成活率，保留B細胞的多樣性，可開(kāi)發(fā)出不同應用需求的抗體。這些抗體具有多重優(yōu)勢：
高特異性：與小鼠和其他嚙齒動(dòng)物相比，兔免疫系統更優(yōu)秀，產(chǎn)生的抗體特異性更強，親和力更高
高穩定性：與常規小鼠生產(chǎn)的單克隆抗體相比，兔IgG結構穩定性高
高親和力：兔的B細胞成熟過(guò)程產(chǎn)生的親和力是嚙齒動(dòng)物的10-100倍
高多樣性：兔擁有豐富的B細胞反應庫，其產(chǎn)生的抗體在表位變異、突變、構象變化等方面優(yōu)勢顯著(zhù)，且多樣性高
單B細胞篩選策略避免了雜交瘤融合和組合展示，已成為高效采集免疫動(dòng)物和人天然抗體庫的重要技術(shù)。使用一系列方法檢測不同B細胞亞群是一種有吸引力的選擇，可確保產(chǎn)生大量和多樣化的高質(zhì)量抗體組合。多種抗體的產(chǎn)生以及發(fā)現罕見(jiàn)的具有獨特和理想特征的產(chǎn)生IgG的B細胞克隆的能力，有助于鑒定適合目的的分子，并可開(kāi)發(fā)成治療藥物或研究試劑。
