肌紅蛋白(Mb)是一種微小的單體蛋白,其重量?jì)H為17.8kDa,主要在脊椎動(dòng)物的心臟和骨骼肌中表達。它具有結合、儲存和運輸氧到線(xiàn)粒體的關(guān)鍵作用。之前的研究已經(jīng)發(fā)現,在心肌中,每克組織濕重中的Mb含量大約為2.5mg,而在骨骼肌中這個(gè)數值約為4.0mg。
Mb由珠蛋白(α-珠蛋白鏈和β-珠蛋白鏈)和血紅素基團共同組成,它通常存在于脊椎動(dòng)物的橫紋肌和心肌中。然而,如果大量的Mb出現在血液、尿液或腎臟等器官中,這將是非常危險的,因為它可能引發(fā)一種可能危及生命的綜合征——橫紋肌溶解癥(RM)綜合征。橫紋肌溶解癥(RM)是骨骼肌受損和細胞內分解產(chǎn)物(主要包括Mb)釋放到血液循環(huán)中。 橫紋肌溶解的誘因多種多樣,包括擠壓傷、創(chuàng )傷、某些感染、藥物、酒精和毒素。在這些因素中,Mb起著(zhù)關(guān)鍵的作用,是橫紋肌溶解病理生理學(xué)的重要組成部分。Mb是骨骼肌的主要成分,但當它釋放到血液中時(shí),可能會(huì )引發(fā)急性腎損傷(AKI),這是嚴重橫紋肌溶解的危險并發(fā)癥。
目前的研究已經(jīng)明確,Mb通過(guò)三種機制引起急性腎損傷(AKI):第一種機制是腎小管堵塞,這是由Mb的毒性所導致的;其次,氧化損傷是由Mb中的鐵解離和自由基的釋放引起的;最后一種機制是由于Mb引起的脂質(zhì)過(guò)氧化。
在診斷和基礎研究中,抗體發(fā)揮著(zhù)重要的作用。對于心肌梗死或橫紋肌溶解的檢測,Mb的實(shí)驗室檢查是最為重要在的患一這項發(fā)生指標。在實(shí)驗動(dòng)物的基礎研究中,RM-AKI或擠壓綜合征-AKI(CS-AKI)仍然是是腎損傷的關(guān)鍵生物標志物。
Mb的抗體檢測取決于抗體的特異性和親和力,單克隆抗體正是針對具有高純度和強特異性?xún)?yōu)勢的特定表位進(jìn)行研發(fā)的。它已被廣泛應用于各種生物醫學(xué)科學(xué)領(lǐng)域,并促進(jìn)了許多學(xué)科的發(fā)展。特別是重組兔單克隆抗體,它具有諸多優(yōu)勢,包括更好的特異性和靈敏度、高批次間一致性和可重復性、無(wú)動(dòng)物源性制劑、長(cháng)期供應安全,以及由于更大的兔免疫庫,對不同靶標具有更廣泛的免疫反應性。目前已經(jīng)有針對人Mb的重組兔單克隆抗體成功制備并商業(yè)化,用于實(shí)驗室室研究。不幸的是,迄今為止,尚未報道用于大鼠Mb免疫原的重組兔抗Mb單克隆抗體具有高親和力、廣泛的物種反應性和多方面的應用。
為此,研究人員通過(guò)外源性大鼠Mb基因真核表達、動(dòng)物免疫、雜交瘤篩選、重鏈和輕鏈基因測序及瞬時(shí)轉染質(zhì)量比優(yōu)化、重組抗體表達純化等技術(shù)制備的新型重組兔抗大鼠Mb單克隆抗體。具有極高親和力(KD= 1.21 pM),廣泛的物種反應性(小鼠,大鼠,人和馬)和良好的組織特異性(骨骼肌和心?。?。應用重組兔抗Mb單克隆抗體通過(guò)蛋白質(zhì)印跡(WB),免疫組織化學(xué)和免疫熒光診斷RM-AKI疾病的腎臟,心肌,骨骼肌組織和血液中的Mb沉積。這項研究揭示了新型單克隆抗體在RM相關(guān)疾病的潛在應用。
雜交瘤技術(shù)是抗體發(fā)現主要途徑之一,在科研抗體開(kāi)發(fā)和抗體藥物發(fā)現中都扮演著(zhù)重要角色。雜交瘤細胞既能無(wú)限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體,可用來(lái)制備高純度、污染少、可重復的單克隆抗體。普健生物作為武漢國家生物產(chǎn)業(yè)基地指定的光谷抗體發(fā)現與篩選公共服務(wù)平臺,提供優(yōu)質(zhì)的雜交瘤細胞開(kāi)發(fā)服務(wù),提供多種抗原免疫方式,經(jīng)融合、篩選、檢測,最終得到高質(zhì)量的雜交瘤細胞。
服務(wù)優(yōu)勢
1. 免疫抗原類(lèi)別:多肽、重組蛋白(五大表達系統)、小分子和 DNA 免疫等多種方案
2. 一站式服務(wù):提供從基因序列到雜交瘤細胞開(kāi)發(fā)及鑒定的整體解決方案
3. 成功率高:?jiǎn)慰鬼椖?2000+,成功率高達 95.4%
4. 個(gè)性化定制:提供 IHC/IF/FC 等應用級別抗體開(kāi)發(fā)服務(wù)
5. 完善的抗體質(zhì)量評價(jià)體系:WB/IHC/IF/FC 等多種檢測方式
6. 專(zhuān)業(yè)技術(shù)團隊:法國首席科學(xué)家帶隊,十余年抗體研發(fā)經(jīng)驗
7. 下游對接服務(wù) : 雜交瘤細胞測序,抗體人源化,重組抗體表達,化學(xué)發(fā)光應用抗體對篩選及大規??贵w生產(chǎn)等服務(wù)
案例展示