納米抗體在腫瘤、病毒感染、抗生素、解毒劑的臨床應用

納米抗體（nanobody， Nb）在中樞神經(jīng)系統疾病、循環(huán)系統疾病、感染性疾病、腫瘤學(xué)和炎癥性疾病中均表現出優(yōu)異的應用價(jià)值和前景，主要聚焦于腫瘤治療且已經(jīng)取得了顯著(zhù)成效，納米抗體-藥物偶聯(lián)、CAR-T、光動(dòng)力療法(PDT)、靶向放射性核素治療等治療方法的不斷研發(fā)改進(jìn)為患者帶來(lái)了新的希望。

靶向腫瘤的納米抗體

Altintas等研發(fā)了一種核心由EGFR靶向納米抗體（nanobody， Nb）與PEG (EGa1-PEG) 結合的納米粒子(NANAP)，NANAP中裝載有多激酶抑制劑17864，在溶酶體吸收和消化后，激酶抑制劑在細胞內釋放，抑制EGFR陽(yáng)性的14C鱗狀頭頸癌細胞的生長(cháng)。Fang等將藥物美登素(DM1) 與MHC-Ⅱ靶向納米抗體VHH7結合，通過(guò)NIR成像及向健康小鼠和荷瘤小鼠注射VHH7-AF47，解剖后比較熒光信號證實(shí)了淋巴瘤在肺、肝、脾、淋巴結等器官中的存在且肝臟中有轉移灶，腫瘤浸潤導致脾腫大，并證實(shí)了VHH7對轉移灶的靶向性，用A20細胞系作為模型，VHH7-DM1治療組腫瘤明顯小于對照組，小鼠平均存活時(shí)間長(cháng)于對照組，可顯著(zhù)抑制肝臟病灶轉移。CD7分子黏附抗體或抗體衍生物后可快速發(fā)生內吞作用。Tang等以單價(jià)和雙價(jià)抗-CD7納米抗體為基礎構建了免疫毒素，并將其編碼為PG001和PG002，采用WST-8法測定細胞毒活性，兩者分別在納摩爾(PG001) 和皮摩爾(PG002) 濃度下能誘導T-ALL細胞系的高效抗原特異性凋亡，能有效、選擇性地殺傷人白血病細胞，顯著(zhù)延長(cháng)治療后小鼠的存活時(shí)間。

放射性標記的納米抗體（nanobody， Nb）也有望成為靶向放射性核素治療的靶向藥物。其中α粒放射性核素正在用于臨床或臨床前評估，2Rs15d是一個(gè)HER-2特異性納米抗體（nanobody， Nb），Pruszynski等利用2Rs15d納米抗體（nanobody， Nb）與偶聯(lián)劑2-(4-異硫氰基芐基)-1, 4, 7, 10-四氮雜環(huán)十二烷-1, 4, 7, 10-四乙酸(p-SCN-Bn-DOTA)，并用α發(fā)射性核素錒-225標記(α-225Ac)，產(chǎn)生225Ac-DOTA-Nb，這種靶向納米抗體（nanobody， Nb）可以為靶細胞提供高致死性和局部化的放射治療。

納米抗體（nanobody， Nb）可充當光敏劑(photosensitizer, PS) 的載體，用于靶向光動(dòng)力療法(photodynamic therapy, PDT)，通常臨床上使用疏水的光敏劑，不能提供腫瘤特異性。增加腫瘤細胞特異性受體的表達水平可以用于靶向這些細胞，即增加腫瘤對光敏劑的特異性攝取，如過(guò)度表達的EGFR等常被用作靶向治療的靶點(diǎn)。采用納米抗體（nanobody， Nb）的PDT可將周?chē)毎膿p害降低，納米抗體-PS共軛物選擇性地結合到靶標上，并且在照明后能夠在體外誘導選擇性地殺死腫瘤細胞。

用于病毒感染的納米抗體
納米抗體（nanobody， Nb）還是中和抗病毒試劑的豐富來(lái)源，可作為治療動(dòng)、植物病毒感染的理想工具。SARS-冠狀病毒-2 (SARS-CoV-2) 的出現導致了一種全球性的流行病，比以往的冠狀病毒傳播性更強，不同的納米抗體（nanobody， Nb）已經(jīng)被開(kāi)發(fā)用于高親和力結合受體結合域(RBD)，競爭性地抑制RBD與人血管緊張素轉換酶2 (ACE2) 的相互作用并中和病毒[65-67]，納米抗體（nanobody， Nb）主要依賴(lài)于3個(gè)可變環(huán)，即圖CDR1、CDR2、CDR3形成的抗原結合位點(diǎn)，納米抗體（nanobody， Nb）相關(guān)技術(shù)的成熟揭示其可作為高效的中和劑，抵御致病性冠狀病毒的侵襲。
普健生物構建了千億級納米抗體VHH文庫，淘選了針對新冠NTD domain的納米抗體（nanobody， Nb），獲得了9條VHH序列，并采用哺乳系統進(jìn)行了9條VHH-Fc的重組表達，9條VHH-Fc序列的表達量均較高。

Strokappe等成功構建了靶向HIV gp41和gp120包膜蛋白的中和性納米抗體，這些新的雙特異性VHH有成為治療劑或殺菌劑的潛力。BBMV是一種種子傳播的植物病毒，Ghannam等通過(guò)噬菌體展示生物淘選分離出8個(gè)BBMV特異性納米抗體，其中3個(gè)成功地抑制了BBMV在體外的傳播且在蠶豆中表達時(shí)能中和BBMV。Orlov等分離出抑制葡萄扇葉病毒(grapevine fanleaf virus, GFLV) 的納米抗體Nb23，在煙草和該病毒的天然宿主葡萄砧木中穩定表達并觀(guān)察到了對GFLV強烈的特異性抵抗力。

用于抗菌素的納米抗體
抗生素療法是治療細菌性感染的主要手段，但由于抗生素不合理、過(guò)度的使用，導致耐藥菌甚至超級細菌的出現，對于嚴重感染的病例，抗生素已經(jīng)無(wú)法發(fā)揮其抗菌抑菌的作用。
而納米抗體（nanobody， Nb）由于特異性強，能精確結合致病細菌表面抗原，拮抗細菌對宿主細胞的黏附，從而治療由細菌引起的感染性疾病，成為開(kāi)發(fā)抗菌治療的新方式。納米抗體（nanobody， Nb）通過(guò)拮抗細菌黏附、運動(dòng)以及細菌毒力因子等不同方式對抗細菌感染，減少致病菌黏附，如通過(guò)選擇能夠抑制細菌在上皮細胞粘附的抗表面抗原的VHH，可用于預防菌源性腹瀉。此外，納米抗體（nanobody， Nb）還可以防止細菌或細菌毒素進(jìn)入細胞，如VHH R303與內化蛋白B (internalin B, Inl B) 上c-Met作用位點(diǎn)結合，能競爭性地抑制李斯特菌入侵赫拉細胞，進(jìn)一步研究結果表明其可用于治療和預防李斯特菌病。

作為解毒劑的納米抗體
在許多國家，蛇、蝎子、蜘蛛等的毒液嚴重危害人類(lèi)健康。研究表明，納米抗體（nanobody， Nb）具有良好的中和能力，Jinkins等成功分離出對α-眼鏡蛇毒素(α-Cbtx) 具有很高親和力的VHHs (C2和C20)，它們能夠完全中和α-Cbtx的致死作用。Calderon等開(kāi)發(fā)了一套針對黃腭蛇毒出血性和肌毒成分的納米抗體（nanobody， Nb），通過(guò)小鼠實(shí)驗確定了Nbs H6、H8和H9具有最好的蛇毒出血作用中和活性，Nbs M28、M35、M43、M67、M85和M88可作為較好的肌毒作用抑制劑。Ahmadi等總結了幾種蝎子毒液治療的抗毒劑，與傳統抗毒劑相比，納米抗體因其具有較高的體外穩定性和低的免疫原性，具有發(fā)展為下一代蝎子抗毒血清的潛力，如有研究表明anti-HNc納米抗體（nanobody， Nb）能夠對毒蝎的HNc類(lèi)毒素的侵害提供完全的保護，一種雙特異性NbF12-10展現了出色的毒液中和能力，對致命的蝎子蜇傷也能提供全面保護。因此，未來(lái)納米抗體（nanobody， Nb）可作為解毒劑以提供安全有效的治療方法。

普健生物擁有自建養殖基地，每年近百頭成年羊駝?dòng)糜诿庖?，穩定提供大量的免疫抗原。擁有近千億級別天然庫，最快在2周內可完成針對各類(lèi)靶點(diǎn)的特異性納米抗體快速篩選，抗體親和力可達10-9M 級別，插入正確率100%，序列正確率97%，隨機選取200個(gè)克隆測序，均無(wú)重復序列；并且免疫庫源自百余只不同種類(lèi)的駝類(lèi)樣本-羊駝（Alpaca ）、駱駝（Camel）、美洲駝（Llama），提供更高抗體多樣性以構建免疫庫，獲得更高親和力VHH序列。

隨著(zhù)研究的不斷深入，納米抗體（nanobody， Nb）優(yōu)越的特性也將會(huì )在更多領(lǐng)域展現其應用價(jià)值，其高穩定性或可使其在醫學(xué)和臨床應用中發(fā)揮作用，如解決疫苗或抗體藥物研發(fā)中存在的療效、安全性、費用等一系列問(wèn)題及抗生素耐藥性的問(wèn)題，或能實(shí)現多途徑給藥等。我們期待未來(lái)納米抗體（nanobody， Nb）更多引人注目的研究成果的問(wèn)世。

參考文獻：
SUN S, TAN X, PANG XY, LI M, HAO XJ. Recent advances in the application of nanobody technology: a review. Chinese Journal of Biotechnology, 2022, 38(3): 855-867.