利用兔單B細胞技術(shù)制備高親和力、多種表位的抗獨特型單克隆抗體

治療性抗體這一類(lèi)藥物的迅速發(fā)展勢如破竹，獨具四大特性：高親和力、專(zhuān)一性強、半衰期長(cháng)以及藥理學(xué)效力強大。這些特性猶如生命的綠色通道，使得治療性抗體成為了開(kāi)發(fā)針對多種人類(lèi)疾病的有效治療方法的成熟平臺。它們的應用領(lǐng)域廣泛，不僅限于標準的免疫球蛋白G (IgG)格式，還可以擴展到抗體片段(scFv, VHH)、藥物偶聯(lián)物以及雙特異性等新型格式的“不可藥物化”靶點(diǎn)，充分展現了其應用的多樣性。隨著(zhù)眾多抗體治療藥物的研發(fā)不斷進(jìn)入臨床前開(kāi)發(fā)和臨床試驗階段，這些項目對高質(zhì)量的關(guān)鍵生物分析試劑的需求愈加嚴格。在這種情況下，抗獨特型試劑抗體(anti-IDs)已成為臨床前和臨床階段生物分析應用的優(yōu)選方案之一，常用的制備方法包括雜交瘤技術(shù)、噬菌體展示免疫抗體庫或合成抗體庫以及單個(gè)B細胞技術(shù)。

兔單抗以其高親和力和多樣性在基礎研究和藥物研發(fā)中頗受青睞。兔單抗與傳統的雜交瘤鼠單抗相比具有更好的抗原識別功能。由于兔骨髓瘤細胞株受專(zhuān)利保護，無(wú)法利用雜交瘤技術(shù)開(kāi)發(fā)兔單抗，普健生物建立了噬菌體展示抗體文庫技術(shù)平臺以及新型的 Xten^TM Mab Single B兔單克隆抗體開(kāi)發(fā)技術(shù)平臺。

單個(gè)B細胞抗體制備技術(shù)是近年來(lái)新發(fā)展的一類(lèi)快速制備單克隆抗體的技術(shù)，是根據每一個(gè) B細胞只含有一個(gè)功能性重鏈可變區DNA序列和一個(gè)輕鏈可變區DNA序列，以及每一個(gè)B細胞只產(chǎn)生一種特異性抗體的特性，從免疫動(dòng)物脾組織或外周血中分離抗原特異性B細胞，通過(guò)單細胞PCR技術(shù)從分泌抗體的單個(gè)B細胞中擴增IgG重鏈和輕鏈可變區基因，然后在哺乳動(dòng)物細胞內表達并獲得具有生物活性的單克隆抗體。

高特異性：與小鼠和其他嚙齒動(dòng)物相比，兔免疫系統更優(yōu)秀，產(chǎn)生的抗體特異性更強，親和力更高
高穩定性：與常規小鼠生產(chǎn)的單克隆抗體相比，兔IgG結構穩定性高
高親和力：兔的B細胞成熟過(guò)程產(chǎn)生的親和力是嚙齒動(dòng)物的10-100倍
高多樣性：兔擁有豐富的B細胞反應庫，其產(chǎn)生的抗體在表位變異、突變、構象變化等方面優(yōu)勢顯著(zhù)，且多樣性高

案例展示

Elisa binding o f Anti-pembrolizumab Antibody,pAb，Rabbit with pembrolizumab coating Antigen:
pembrolizumab，1ug/mL
Anti-pembrolizumab Antibody,pAb，Rabbit dilution from 1000ng/mL EC50=9.566ng/mL

研究人員利用單個(gè)B細胞技術(shù)制備了抗獨特型抗體（anti-IDs），通過(guò)兔抗體分子克隆、序列分析和表達、兔抗體結合親和力和表位表征等進(jìn)行驗證，這種具有高度Ab1-CDRs特異性和更多樣化表位的高親和力抗獨特型抗體（anti-IDs），為支持重組治療性抗體項目的生物分析項目提供了切實(shí)的好處。

抗獨特型抗體（anti-IDs）表位類(lèi)型表征

參考文獻
WeiYu Lin,Rapid identification of anti-idiotypic mAbs with high affinity and diverse epitopes by rabbit single B-cell sorting-culture and cloning technology,PLoS One,December 21, 2020