基于兔免疫抗體庫制備兔單克隆抗體

作為靶向特異性抗體的來(lái)源，兔比小鼠具有獨特的優(yōu)勢。它們產(chǎn)生的親和力抗體高于小鼠，并可能針對小鼠免疫原性差或耐受差的抗原或表位引發(fā)強烈的免疫反應。然而，由于小鼠融合伙伴細胞系的廣泛應用，以及成熟的融合和克隆小鼠雜交瘤的工具和方案，目前絕大多數單克隆抗體來(lái)源于小鼠。噬菌體展示技術(shù)篩選抗體庫是一種替代雜交瘤技術(shù)制備特異性單克隆抗體的方法。利用免疫動(dòng)物的B細胞構建抗體文庫，通過(guò)噬菌體展示技術(shù)對抗體文庫進(jìn)行篩選，可以獲得高親和力的非鼠源單克隆抗體。

基于噬菌體展示技術(shù)的兔免疫Fab庫的建立，可以方便地分離兔單克隆抗體。免疫后，從動(dòng)物脾臟中提取B細胞cDNA，通過(guò)PCR擴增抗體可變域庫并組裝成Fab庫。然后將Fab基因克隆到噬菌體載體并轉化到大腸桿菌，完成兔免疫Fab基因文庫的構建。該文庫可針對免疫抗原進(jìn)行生物篩選，用于快速鑒定高親和力、靶向特異性的兔單克隆抗體。

抗體庫是編碼特性未知抗體的抗體基因的巨大集合（通常大于10¹⁰）?？贵w庫是通過(guò)噬菌體展示和其他體外選擇技術(shù)來(lái)發(fā)現抗體的重要來(lái)源，其設計是成功發(fā)現抗體的關(guān)鍵。抗體庫的類(lèi)型包括隨機肽庫、免疫庫和天然庫。

隨機肽庫：將化學(xué)合成的隨機寡核苷酸序列與噬菌體的表面蛋白基因融合，在噬菌體表面表達出各種氨基酸組合的隨機序列短肽。利用噬菌體展示隨機肽庫可以高通量篩選各種抗原的抗原表位

免疫庫：免疫庫由經(jīng)過(guò)免疫(包括疫苗注射、微生物感染、自身免疫疾病、腫瘤等)后的供體B淋巴細胞的抗體基因構建。對于特定免疫抗原的抗體淘選的效率較高，但一般僅適用于一種特異性抗體的選擇，庫容量要求不高，一般10⁶-10⁸的庫容量就可滿(mǎn)足需要

天然庫：采用不經(jīng)免疫的人或動(dòng)物來(lái)源的外周血淋巴細胞、骨髓、脾細胞的B細胞作為材料，進(jìn)行基因擴增，但親和力通常較低。骨髓內和骨髓外所有抗體基因都包含在內，所構建的抗體庫適用于所有抗原所對應的抗體的選擇，庫容量要求較高，最小需要達到 10⁹，因為目前估算的自然界的抗原種類(lèi)在這個(gè)數量級上

普健生物構建了千億級別、高親和力全人源重組天然抗體文庫，經(jīng)過(guò)驗證，任意靶點(diǎn)從文庫中直接篩選，一般可以獲得十幾個(gè)到上百個(gè)高親和力的克隆，其親和力、特異性都達到行業(yè)領(lǐng)先水平。

優(yōu)勢：
1.序列正確性高，現階段庫容已達近千億級別（10¹¹pfu)。
2.兩步法建庫，先連入輕鏈再連入重鏈，將來(lái)自全世界不同地區人種來(lái)源的輕鏈和重鏈隨機組合，保證了庫的高質(zhì)量和多樣性。
3.分為κ和λ兩種輕鏈亞型的單鏈抗體庫，與大多數商業(yè)化混合庫不同，即可用于篩選κ型抗體，也可用于篩選λ型的高親和力抗體。
4.帶有His標簽，可直接用phagemid表達抗體，His標簽純化


 

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