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用于疾病的單克隆抗體是一類(lèi)快速發(fā)展的藥物，具有親和力強、特異性強、半衰期長(cháng)和藥理學(xué)效力強的特點(diǎn)。這些特性使抗體成為開(kāi)發(fā)針對多種人類(lèi)疾病的有效治療方法的成熟平臺。它們的應用領(lǐng)域不僅限于標準的免疫球蛋白G (IgG)格式，還可以擴展到抗體片段(scFv, VHH)、藥物偶聯(lián)物和雙特異性等新型格式的"不可藥物化"靶點(diǎn)。隨著(zhù)眾多抗體治療藥物(Ab1)不斷進(jìn)入臨床前開(kāi)發(fā)和臨床試驗，這些項目對高質(zhì)量的關(guān)鍵生物分析試劑的需求很高。在這種情況下，抗獨特型抗體(（Anti-idiotype antibody, Anti-ID Abs)已成為臨床前和臨床階段生物分析應用的優(yōu)選方案之一。常用的制備方法包括體內雜交瘤技術(shù)、體外噬菌體展示免疫抗體庫或合成抗體庫。
兔單抗以其高親和力和多樣性而聞名，使其成為治療候選生物分析程序中高度專(zhuān)業(yè)化研究試劑的潛在有用來(lái)源。過(guò)去兔單克隆抗體的產(chǎn)生采用雜交瘤技術(shù);然而，目前的發(fā)現是由更強大的單個(gè)B細胞培養和克隆方法驅動(dòng)的。
高質(zhì)量的抗獨特型抗體(Anti-ID Abs, Ab2)，特別是CDR特異性的Ab2，對開(kāi)發(fā)敏感、特異和穩健的PK檢測和抗藥物抗體(ADA)檢測至關(guān)重要，以支持藥物開(kāi)發(fā)項目的臨床前和臨床研究。研究人員使用基于兔單個(gè)B細胞技術(shù)的方法來(lái)擴大了常規制備大樣本抗獨特型抗體的能力，并且取得了很高的成功。
基于單個(gè)B細胞技術(shù)的Xten™ Mab Single B兔單克隆抗體開(kāi)發(fā)有三個(gè)主要流程，鑒定和分離單個(gè)B細胞；擴增和克隆抗體基因；表達、篩選和鑒定抗原特異性抗體。
Xten™ Mab Single B兔單克隆抗體開(kāi)發(fā)以單個(gè)B細胞為起始點(diǎn)，利用每個(gè)B細胞只產(chǎn)生一種特異性抗體的特性，直接從免疫的兔子中通過(guò)隨機分離和抗原特異性分離兩種方式從外周血或淋巴組織中分離單B細胞，從單個(gè)B細胞中擴增出抗體基因，進(jìn)而獲得抗原特異性抗體。該技術(shù)所制備的抗體具有高通量、高效率、高穩定性、高特異性等優(yōu)點(diǎn)，保留了豐富的基因多樣性和輕重鏈可變區的天然配對，應用前景廣泛，是最高效的抗體篩選方法之一。特別是在快速應對病原微生物傳染病的抗體開(kāi)發(fā)上有著(zhù)巨大優(yōu)勢。
在這項研究中，研究人員建立了一種富集IgG+ B細胞的方法，并從外周血單個(gè)核細胞(PBMC)中鑒定出抗原特異性IgG+ B細胞。通過(guò)基于磁珠的負向選擇策略有效地清除PBMCs中的非IgGB細胞，包括IgM B細胞，髓系細胞和T細胞。這種技術(shù)不僅顯著(zhù)提高了IgG+ B細胞的數量，而且還縮短了分選時(shí)間，從而有可能提高B細胞的存活率，這有助于提高PCR及后續分子克隆的成功率。
在臨床前開(kāi)發(fā)和臨床試驗期間，抗獨特型抗體是PK和ADA檢測所需的寶貴試劑，用于治療藥物的生物分析支持。高靈敏度、高特異性、高親和力以及表位結合特異性是該類(lèi)抗體試劑的重要特點(diǎn)。基于兔單克隆B細胞技術(shù)發(fā)現的單克隆抗體使研究人員能夠在滿(mǎn)足嚴格的生物分析性能要求的同時(shí)，在多種單克隆抗體項目中持續、高效和高產(chǎn)地制備出具有所需特性的單克隆抗獨特型抗體組合，為單抗治療開(kāi)發(fā)項目的生物分析支持提供了有價(jià)值的關(guān)鍵試劑。
參考文獻
WeiYu Lin,Rapid identification of anti-idiotypic mAbs with high affinity and diverse epitopes by rabbit single B-cell sorting-culture and cloning technology,PLoS One, December 21, 2020.
