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在我們進(jìn)行真核細胞蛋白表達時(shí)，真核細胞培養是一個(gè)必不可少的過(guò)程，就和雜交瘤細胞蛋白表達中的雜交瘤細胞融合一樣，它從根本上制約著(zhù)真核蛋白表達的成功與否。然而，和蛋白表達一樣，我們在進(jìn)行真核細胞培養的過(guò)程中，也常常會(huì )遇到各種各樣的問(wèn)題。有鑒于此，普健生物在這里和大家聊聊有關(guān)真核細胞培養中的幾個(gè)常見(jiàn)問(wèn)題，以及遇到這些問(wèn)題時(shí)的解決方案。
1、細胞不貼壁
在培養過(guò)程中，如果細胞不貼壁，一般來(lái)說(shuō)造成這個(gè)現象的原因主要有三種：胰蛋白酶消化過(guò)度、支原體污染以及培養液中缺乏貼壁因子。這個(gè)時(shí)候，我們可以考慮通過(guò)降低胰蛋白酶濃度、分離培養物以及清潔支架的方式來(lái)解決問(wèn)題。當然了，如果通過(guò)如上幾個(gè)方式依然沒(méi)有解決，那么，我們需要結合培養過(guò)程進(jìn)行分析對比，找出其問(wèn)題所在;
2、PH值變化快
培養液中PH值變化過(guò)快的原因相對較多，比如緩沖系統緩沖力不夠、培養液鹽濃度不正確、培養液污染、二氧化碳張力不夠等等，當出現這個(gè)問(wèn)題時(shí)，我們可以適當減少培養液中二氧化碳的含量，或者改用不依賴(lài)二氧化碳的培養液，并保證培養液的純度，減少其污染來(lái)解決;
3、細胞生長(cháng)緩慢
在預定時(shí)間內細胞培養量不足，細胞存在生長(cháng)緩慢的情況。其原因主要是培養液選擇不對、相關(guān)試劑保存不當以及培養液被污染(少量細菌或真菌感染)。當細胞培養緩慢時(shí)，我們可以考慮更換培養液成分、增加原始細胞濃度、補加谷氨酰胺或生長(cháng)因子以及加入抗生素等方式來(lái)進(jìn)行解決;
4、細胞死亡
培養一段時(shí)間后發(fā)現細胞直接死亡，這個(gè)現象發(fā)生的主要原因是培養箱內缺二氧化碳、箱內溫度變化大、細胞損傷或死亡、培養過(guò)程中代謝物堆積等，這個(gè)時(shí)候，我們需要定時(shí)檢測箱內二氧化碳含量、控制好箱內溫度、實(shí)驗前檢測好細胞活性，并檢測培養液的滲透壓，這樣才能在更大程度上避免細胞的死亡;
當然了，細胞培養過(guò)程中需要面臨的問(wèn)題還有很多，只有將這些方面都好了后，才能在更大程度上保證細胞的培養。對于真核細胞表達來(lái)說(shuō)，只有活性好、質(zhì)量高的細胞才能在更大程度上滿(mǎn)足我們后期有關(guān)蛋白制備的需求。武漢普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供真核蛋白表達服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。
