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納米抗體是一種從駝類(lèi)動(dòng)物以及鯊魚(yú)等動(dòng)物體內提取的一種天然缺失輕鏈的抗體，因為其結構很小，達到納米級，因此被稱(chēng)為納米抗體。納米抗體的可溶性極高，而且不易聚集、耐高溫、耐強酸強堿等，適用于各種原核、真核蛋白的表達。下面，普健生物和大家具體聊聊有關(guān)納米抗體制備的具體過(guò)程。
1、目的基因提取
從動(dòng)物體內(駝類(lèi)動(dòng)物或鯊魚(yú))提取所需的RNA和cDNA，通過(guò)相關(guān)的生物技術(shù)手段，將其提取出來(lái)并進(jìn)行克隆表達;
2、納米抗體基因構建
通過(guò)選擇適當的引物，對VHH基因進(jìn)行擴增。而后將擴增后的VHH基因克隆到表達載體(一般包含啟動(dòng)子、標記基因以及VHH基因等)中;
3、選擇合適的蛋白表達系統
一般來(lái)說(shuō)，原核表達與真核表達的選擇是各不相同的。對于原核表達系統來(lái)說(shuō)，可以選擇大腸桿菌表達系統來(lái)表達，而對于真核表達系統過(guò)來(lái)說(shuō)，可以選擇哺乳動(dòng)物表達系統來(lái)進(jìn)行表達;
4、蛋白表達及優(yōu)化
通過(guò)細胞轉染或細菌感染的方式，將目的基因轉染到表達載體中，通過(guò)對相關(guān)培養條件進(jìn)行優(yōu)化(比如溫度、培養基成分、轉染時(shí)間等)，從而提升納米抗體的表達概率;
5、細胞培養
通過(guò)調控相應的培養條件，對轉染后的細胞進(jìn)行培養，使得目的基因隨著(zhù)蛋白的表達而表達，而后通過(guò)相關(guān)細胞破碎技術(shù)，將蛋白釋放出來(lái)，而后通過(guò)離心等方式獲得細胞上清液;
6、蛋白純化
通過(guò)親和層析法(通過(guò)特異性靶標結合的特性，使用親和層析柱來(lái)提升其純度)、透析法(在進(jìn)行親和層析后，進(jìn)行透析，去除其中的雜質(zhì))、離心法(利用超速離心的方式去除細胞碎片和大顆粒物)等方式，提升蛋白的純度;
7、蛋白評估
對蛋白進(jìn)行純度、功能等各方面特性的評估，而后將其進(jìn)行凍存，以實(shí)現其長(cháng)期保持的穩定性;
以上就是納米抗體制備的一般表達過(guò)程，當然了，對于不同的公司來(lái)說(shuō)，因為技術(shù)、儀器、技術(shù)團隊等方面的區別，其制備過(guò)程有著(zhù)一定不同，但是，總體來(lái)說(shuō)是大體相同的。而納米抗體制備的具體流程，需要結合目的蛋白的不同方式來(lái)進(jìn)行選擇，這樣才能更好地獲得所需蛋白。更多納米抗體制備的相關(guān)知識，敬請關(guān)注普健生物。
