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前面我們和大家具體介紹過(guò)“抗體人源化的分類(lèi)”，今天，我們在這里具體再和大家聊聊有關(guān)抗體人源化中的一些介紹過(guò)程。
抗體人源化作為解決鼠源抗體免疫原性的方式，其制作過(guò)程雖然說(shuō)各有不同，但是，整體的過(guò)程也是大致相同的，但是，很多人在實(shí)驗的過(guò)程中，常常會(huì )碰到一些問(wèn)題，出現實(shí)驗結果偏差的現象。其實(shí)這個(gè)問(wèn)題非常的常見(jiàn)，主要還是因為我們沒(méi)有嚴格地按照順序來(lái)進(jìn)行。下面，普健生物就和大家具體聊聊有關(guān)抗體人源化的實(shí)驗步驟。
1、抗體可變區/抗體全長(cháng)測序
通過(guò)對鼠源單克隆抗體細胞系進(jìn)行可變區/抗體全長(cháng)基因序列測序。
2、嵌合抗體表達及抗原抗體結合分析
在過(guò)程1的基礎上，結合可變區的序列和人源恒定區進(jìn)行嵌合抗體序列的設計，然后再通過(guò)哺乳系統來(lái)進(jìn)行嵌合抗體的表達;通過(guò)對嵌合抗體的抗原抗體進(jìn)行分析，同時(shí)提供樣本進(jìn)行親和力檢測。
3、人源化抗體設計
通過(guò)CDR移植、回復突變、生物信息學(xué)分析等方法對抗體的VH和VL區域進(jìn)行人源化設計。
4、人源化抗體表達
密碼子優(yōu)化，基因合成，亞克隆，轉染，抗體表達及純化，8-10周。
5、人源化抗體性質(zhì)檢測
結合力檢測：ELISA/FACS測定EC50值，或Biacore/Octet測定Kd值;人源化抗體體外生物活性分析并與嵌合抗體進(jìn)行比較;人源化抗體與同源性物種的交叉反應性分析;人源化抗體生物物理特性分析：SEC-HPLC分析，DS-PAGE分析，DSC分析。
對于抗體人源化來(lái)說(shuō)，人源化替換點(diǎn)可以說(shuō)直接影響到CDR區構象的關(guān)鍵，所以，需要引起高度的重視。否則，極有可能體驗“一失足成千古恨”的感覺(jué)。普健生物為廣大用戶(hù)提供專(zhuān)業(yè)的抗體人源化服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。
