質(zhì)粒轉染的具體操作步驟及其注意事項

　　質(zhì)粒轉染，相信大家都不會(huì )陌生，在我們進(jìn)行哺乳動(dòng)物細胞蛋白表達和昆蟲(chóng)細胞表達中都會(huì )用到這個(gè)過(guò)程，可以說(shuō)轉染的效果直接影響到我們后期實(shí)驗的成敗。今天普健生物就和大家具體聊聊質(zhì)粒轉染以及在操作過(guò)程中需要注意到的一些事項，以便于大家更好地進(jìn)行實(shí)驗。

　　昆蟲(chóng)細胞擴大轉染

　　1、挑選狀態(tài)良好的細胞(選取活力在98%以上且在生長(cháng)期內的)，將其放置于細胞培養的六孔板上，平均90萬(wàn)/空孔;

　　2、將細胞房在29度的培養皿上靜置半小時(shí)，在細胞完全貼壁后再進(jìn)行轉染;

　　3、轉染;

　　4、轉染體系之后，再將其放置在室溫下培養半小時(shí)以上;

　　5、孵育完成之后，再將其滴加到準備好的6孔板中;

　　6、在六孔板內培養4-6天后，取其上清液即可得P1代病毒;

　　轉染過(guò)程中需要注意哪些事項?

　　1、細胞的密度

　　一般保持細胞密度在70%-90%時(shí)進(jìn)行轉染最好，過(guò)高或過(guò)低都會(huì )對轉染的效果造成影響(細胞鋪板和轉染最好當天進(jìn)行);

　　2、細胞的狀態(tài)

　　盡量選擇適度傳代的細胞，而且不同批次的實(shí)驗也盡量選擇相同傳代次數的細胞。而且細胞盡量保持均勻且密度一致，盡量確保不要選擇被支原體污染的細胞;

　　3、細胞種類(lèi)的選擇

　　不同的細胞在做轉染是所需要的體系是各不相同的，如果我們在一種體系上使用不同的細胞，納米，其所得的結果是各不相同的。所以，同一種體系，盡量用同一種細胞;

　　4、轉染試劑選擇

　　試劑的選擇一般我們都要遵循高效、方便、低價(jià)、低毒，一般來(lái)說(shuō)，每種轉染試劑都有相應的成功文獻，我們完全可以按照那個(gè)來(lái)選擇;

　　質(zhì)粒轉染雖然是基礎性的實(shí)驗，但是，它卻制約著(zhù)我們的實(shí)驗是否成功的關(guān)鍵，所以，還是要花費不少心思的。普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供哺乳動(dòng)物細胞表達以及昆蟲(chóng)細胞表達服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。