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一、實(shí)驗目的
本案例基于普健自有哺乳表達系統—高產(chǎn)量pATX系列載體及馴化CHO系列細胞，通過(guò)密碼子優(yōu)化，基因合成方法，合成重鏈和輕鏈的可變區，再分別通過(guò)亞克隆的方式將可變區構建至PATX系列表達載體，雙質(zhì)粒瞬時(shí)轉染XtenCHO細胞，通過(guò)SDS-PAGE驗證重組抗體表達情況，經(jīng)表達驗證后，擴大培養收集細胞上清并通過(guò)proteinA親和柱純化獲得重組抗體。
二、實(shí)驗方案
(1)以客戶(hù)提供的重鏈輕鏈序列為模板，通過(guò)密碼子優(yōu)化，選擇更適宜XtenCHO細胞系的基因序列，進(jìn)而確 定表達質(zhì)粒的構建方案。
(2)采用普健生物自主載體PATX進(jìn)行構建，經(jīng)測序驗證無(wú)誤后，提取無(wú)內毒素質(zhì)粒。
(3)轉染前，確定XtenCHO細胞狀態(tài)，待轉染完成，培養數天后收取上清，通過(guò)SDS-PAGE驗證重組抗體表 達情況，最后通過(guò)Protein A純化法獲得重組抗體。
三、實(shí)驗結果
(1)抗體純度鑒定
圖 1. 抗體質(zhì)檢圖. 考馬斯亮藍染色.
A. 還原PAGE. B. 非還原 PAGE.
(2)通過(guò)SEC-HPLC進(jìn)一步純化，獲得單一峰的重組抗體，HPLC檢測純度在98%。
(3)抗體交付
純化抗體產(chǎn)量：5L表達體系
| 抗體 | 濃度及分裝 | 數量 | 質(zhì)量 |
| 抗體 A | 25 mg/ml；1ml/管。 | 20管 | 500 mg |
注：內毒素水平：0.45 EU/ml
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