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畢赤酵母表達是原核表達中最常用的方法之一，因為其遺傳背景清晰、表達安全、制備成本低等優(yōu)點(diǎn)，使得在很多項目上都會(huì )優(yōu)先考慮。但是，如何讓這些耗材產(chǎn)生最大價(jià)值，那就是我們保存和培養的問(wèn)題了。為什么大公司在成本上要比小公司更低?因除了因為技術(shù)和儀器方面的原因外，對耗材的保存和培養也是很大的一個(gè)方面。
1、計算好酵母的倍增時(shí)間
據生物學(xué)統計，酵母的生長(cháng)分裂會(huì )隨著(zhù)一定的曲線(xiàn)來(lái)變化，通常一OD值來(lái)繪制。一般來(lái)說(shuō)，酵母分裂曲線(xiàn)主要分為三個(gè)時(shí)期：延滯期、對數生長(cháng)期以及穩定期，在對數期時(shí)，細胞分裂旺盛且細胞數目倍增。這個(gè)時(shí)候，我們需要主要補充營(yíng)養，一旦營(yíng)養耗盡，細胞分裂減緩，則會(huì )進(jìn)入穩定期。所以，了解本增時(shí)間，能夠很好地讓我們安排實(shí)驗進(jìn)程;
2、制備培養基
了解好OD圖后，我們就需要進(jìn)行酵母菌的培養工作了。酵母的主要糧食是：酵母提取物(去除細胞壁的細胞成分)、蛋白胨以及糖分。培養基則是將酵母提取物和蛋白胨溶解于水中之后，通過(guò)高壓滅菌后，倒入到平板中，凝固后即是我們所需的培養基;
3、酵母的培養
將酵母細胞種到小體積的培養基中，并在30度的搖床或旋轉器上培養48小時(shí)。當然了，對于大規模培養如上的方式就不適合了，需要先確定酵母培養物的OD值，然后將其稀釋到起始OD值的0.1-0.2倍，然后再放到30度搖床上培養到所要的OD值;
4、酵母的存儲
平板培養可將培養基放置于4度環(huán)境下保存3個(gè)月，如果要得到新鮮培養物，則需要在新鮮培養基上重新規劃細胞。對于需要長(cháng)期保存的酵母菌來(lái)說(shuō)，可將其分別培養在不同的甘油管中，冷凍保存。一般來(lái)說(shuō)，-80度環(huán)境下可以保存幾年;
酵母的健康可以或直接關(guān)系到我們后期實(shí)驗的結果，以及能否表達出我們想要的蛋白產(chǎn)品。如果這些工作做好了，不僅能更好地滿(mǎn)足我們的實(shí)驗需求，而且能夠在極大程度上降低實(shí)驗成本。武漢普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供酵母蛋白表達服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。
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