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真核蛋白表達相信大家不會(huì )覺(jué)得陌生，我們前面和大家具體聊過(guò)有關(guān)真核表達的幾種方式以及其優(yōu)勢所在：“常見(jiàn)的真核表達系統有哪幾種?它們各自有哪些優(yōu)勢?”。今天普健生物再和大家具體聊聊有關(guān)真核表達的步驟以及在表達過(guò)程中導致其表達低下的原因。
真核表達，顧名思義，就是利用真核細胞進(jìn)行蛋白表達的技術(shù)服務(wù)，通常在需要大量高質(zhì)量蛋白的時(shí)候會(huì )采用這個(gè)方式，當然了，藥物開(kāi)發(fā)以及生物學(xué)研究上也常常會(huì )使用到。
真核表達服務(wù)的具體步驟一般如下：
1、基因克隆。通過(guò)基因技術(shù)將目的基因克隆到真核的表達載體當中去;
2、細胞培養。將載體轉染到真核細胞中，并通過(guò)細胞培養的方式對細胞進(jìn)行擴增;
3、蛋白表達。通過(guò)操作以及環(huán)境搭配等手段滿(mǎn)足蛋白的表達條件，使得目的蛋白得以表達;;
4、蛋白純化。通過(guò)相關(guān)技術(shù)對蛋白進(jìn)行純化(具體純化方法可參考“蛋白純化方法之沉淀法的幾種常用方式介紹”);
當然了，不同的蛋白表達公司因為技術(shù)實(shí)力、實(shí)驗環(huán)境以及儀器使用等方面的不同，在表達結果方面會(huì )存在很大的不同，甚至會(huì )出現表達量低的情況。為什么會(huì )會(huì )發(fā)生這樣的情況呢?且聽(tīng)普健生物和您具體分析。
一般來(lái)說(shuō)，導致蛋白表達量低下的原因有很多，主要是如下幾種：
1、轉染效率低。在進(jìn)行細胞轉染時(shí)，有一定的概率會(huì )發(fā)生轉染率低的現象(當然了，也只有少數細胞會(huì )出現這個(gè)情況)，從而造成蛋白表達量降低;
2、基因轉錄水平低。一些基因的表達會(huì )受到細胞因子調節的原因，造成表達載體轉錄水平低而造成蛋白表達低的情況;
3、翻譯后修飾不完整。在進(jìn)行蛋白修飾的過(guò)程中發(fā)生了異常，導致蛋白結構不完整，從而造成表達量低的情況;
4、表達的蛋白不穩定。表達后的蛋白在溶液中因為不穩定的情況，出現失活的現象;
5、細胞毒素的影響。細胞產(chǎn)生的毒素造成蛋白失活;
6、條件不符合。蛋白表達的環(huán)境達不到要求，造成蛋白表達量低;
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