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穩定細胞系也叫穩定細胞表達系，是一種通過(guò)將目標基因整合到宿主細胞中后傳代，保證細胞可以穩定表達的一種細胞表達系統。就目前來(lái)說(shuō)，穩定細胞系構建的方法主要有三種：慢病毒感染細胞、轉座子介導的穩定細胞系構建以及基因敲入法。今天，普健生物就和大家具體聊聊這三種穩定細胞系的構建方法以及相應問(wèn)題解析。
1、慢病毒感染
我們知道，慢病毒技術(shù)可以感染絕大多數的細胞，而且病毒包裝技術(shù)也是非常的成熟，可以說(shuō)是穩定細胞系的首選系統。當然了，慢病毒技術(shù)也有著(zhù)一定的不足之處，比如慢病毒包裝容量有限制，對于那些轉錄區域較長(cháng)的基因來(lái)說(shuō)，其有著(zhù)極大的局限性。而且慢病毒為逆轉錄病毒，對于部分的基因翻譯有著(zhù)一定的影響;
2、轉座子介導的穩定細胞株構建
也叫跳躍基因，通過(guò)剪切和粘貼來(lái)實(shí)現DNA片段的高效轉移。轉座子其實(shí)就是通過(guò)編碼轉座酶，將轉座酶基因在基因序列上進(jìn)行整合;
3、基因敲入
采用基因技術(shù)對目的基因進(jìn)行定點(diǎn)敲入，依靠細胞自身的修復機制完成;
穩定細胞系構建中的常見(jiàn)問(wèn)題：
1、穩定細胞系構建需要進(jìn)行密碼子優(yōu)化嗎?
對于不同的基因序列來(lái)說(shuō)，因為其密碼子的簡(jiǎn)易性以及種類(lèi)、數量上面的察覺(jué)，想要構建的穩定細胞系長(cháng)期穩定的表達，密碼子優(yōu)化是非常必要的;
2、如何選擇合適的啟動(dòng)子?
對于不同的制備需求，我們需要設定特定的啟動(dòng)子。比如CMV啟動(dòng)子除了在干細胞外，其他大多數細胞類(lèi)型中都可以得到較高活性表達;懸浮細胞中采用SFFV啟動(dòng)子會(huì )獲得更高的表達活性等;
當然了，對于穩定表達系的構建來(lái)說(shuō)，會(huì )遇到的問(wèn)題非常的多，很多時(shí)候，即便我們嚴格按照制備方式來(lái)執行也依然可能會(huì )出現問(wèn)題。因為，對于大部分的人來(lái)說(shuō)，穩定細胞系的構建本就是一個(gè)龐大的過(guò)程，任何一個(gè)小問(wèn)題都可能造成構建的失敗。武漢普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供穩定細胞系構建服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。
