穩定細胞株的構建方式及其注意要點(diǎn)

　　在很多實(shí)驗過(guò)程中我們都需要用到穩定細胞系，只是因為其構建時(shí)間長(cháng)、構建成功率低，使得大家放棄這個(gè)方法。構建穩定細胞株往往耗時(shí)半年以上，別人的實(shí)驗都收尾了，而這邊卻一點(diǎn)動(dòng)靜都沒(méi)有，可以說(shuō)，其中耗費的精力足夠寫(xiě)一篇血淚史了。那么，如何構建穩定細胞株呢?今天，普健生物就和大家具體聊聊。

　　首先，我們需要知道，在什么情況下，需要構建穩定細胞株。

　　1、長(cháng)期目的細胞研究時(shí)。一些細胞需要長(cháng)期研究，通過(guò)構建穩定細胞株可以降低細胞變異率，極大程度上方便了實(shí)驗研究;

　　2、蛋白半衰期時(shí)間長(cháng)時(shí)。當蛋白半衰期長(cháng)時(shí)，瞬時(shí)RNA就只能通過(guò)干擾表達，但是卻無(wú)法去除已經(jīng)表達的蛋白，通過(guò)穩定細胞株則可以更輕松實(shí)現;

　　3、高拷貝數表達需求時(shí)。這個(gè)時(shí)候會(huì )因為一些人為原因導致結果不準確;

　　4、需要誘導表達時(shí)。主要是一些致死基因或者是需要空表達的;

　　5、需要用到細胞時(shí)。比如裸鼠成瘤時(shí);

　　那么，如何構建穩定細胞株呢?其具體原理是怎樣的?

　　其實(shí)就是通過(guò)將外源DNA/RNA克隆到具有某種抗性基因的載體上，重組載體被轉染之宿主細胞并整合到染色體中，能夠隨著(zhù)細胞分裂而穩定地傳代下去;

　　構建穩定細胞株有哪些方面需要注意的?

　　穩定細胞株構建是一個(gè)長(cháng)期過(guò)程，從質(zhì)粒包裝到慢病毒包裝，再到細胞感染以及篩選等等過(guò)程，每一步都至關(guān)重要。往往會(huì )因為一些小的失誤，導致半年時(shí)間浪費掉的現象也不少見(jiàn)，所以，細節方面一定要嚴格把控;

　　對于一些小公司來(lái)說(shuō)，穩定細胞株的構建可謂得不償失，但是對于長(cháng)期發(fā)展來(lái)說(shuō)，穩定細胞株可以說(shuō)是一項必不可少的技術(shù)。相對于一般的蛋白制備手段來(lái)說(shuō)，穩定細胞株構建不僅能有效減少批次之間的差異問(wèn)題，更是能在極大程度上保證蛋白抗體的活性一致性。普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供穩定細胞株構建服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。