雜交瘤細胞測序的步驟及其優(yōu)勢和應用

　　在雜交瘤細胞制備的過(guò)程中，雖然篩選出來(lái)的雜交瘤細胞能夠通過(guò)冷凍保存，但是依然存在細胞失活的風(fēng)險。所以，為了克服雜交瘤細胞保存的問(wèn)題，我們常常會(huì )選擇對雜交瘤細胞進(jìn)行測序，能夠快速且準確地進(jìn)行后期的抗體制備。今天，普健生物和大家具體聊聊有關(guān)雜交瘤細胞測序的具體步驟和應用。

　　雜交瘤細胞測序的具體步驟：

　　1、雜交瘤細胞培養。先取出雜交瘤細胞進(jìn)行復蘇，然后在37度的環(huán)境下培養10天，至細胞生長(cháng)旺盛時(shí)再收集細胞;

　　2、mRNA提取。裂解細胞后加入氯仿，離心15分鐘后提取上清液。取上清液并加入異丙醇離心10分鐘，取沉淀洗凈，晾干后加入適量DEPC溶解;

　　3、轉率cDNA。選擇合適的反應體系進(jìn)行擴增，合成cDNA第一條鏈，而后根據已知的cDNA合成第二條鏈;

　　4、獲得可變區基因。對cDNA進(jìn)行擴增，獲得輕鏈/重鏈可變區基因;

　　5、抗體測序。對基因進(jìn)行陽(yáng)性克隆并測序;

　　6、分析測序結果。通過(guò)生物信息學(xué)分析，得到抗體序列;

　　雜交瘤細胞測序的優(yōu)勢：

　　雜交瘤測序可以更為準確地進(jìn)行質(zhì)譜分析，能夠提供更加準確且可靠的結果;

　　雜交瘤細胞測序的應用：

　　1、用于進(jìn)行相關(guān)基因測序的專(zhuān)利性保護;

　　2、用于保存測序信息，防止雜交瘤細胞丟失單抗信息;

　　3、用于表達純度更高的重組單克隆抗體;

　　4、縮短雜交瘤細胞克隆的耗時(shí)過(guò)程，加速單克隆抗體生產(chǎn);

　　5、提升單抗親和力;

　　6、構建嵌合抗體以及抗體人源化;

　　雜交瘤抗體測序能夠帶來(lái)的好處是毋庸置疑的，不僅能夠有效降低抗體制備的批次性差異問(wèn)題，更是能夠在極大程度上提升抗體的親和力。當然了，測序的過(guò)程相對來(lái)說(shuō)要復雜一些，需要一定的技術(shù)支持。普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供雜交瘤抗體測序服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。