大腸桿菌是第一個(gè)用于蛋白生產(chǎn)的宿主菌,因為它的遺傳背景清晰,培養操作的過(guò)程簡(jiǎn)單,而且引起它轉化快、傳導效率高、生長(cháng)快等優(yōu)點(diǎn),最主要的是因為其成本低廉,使得其廣泛地使用與蛋白制備上。而且因為其蛋白表達要遠高于其他基因表達系統,使得其成為使用最為廣泛的蛋白表達系統。
那么,大腸桿菌蛋白表達的組成是什么呢?
1、表達載體
直接通過(guò)載體來(lái)進(jìn)行蛋白表達。我們知道,完整的載體必須有復制的起點(diǎn)、啟動(dòng)子、插入基因、篩選標記和終止子。所以,我們只需要根據蛋白生成的環(huán)境對其進(jìn)行表達,或者通過(guò)在目的蛋白的N端或C端加入特殊序列,促進(jìn)蛋白的可溶性和正確折疊;
2.外源基因
在大腸桿菌表達體系中要表達的基因即外源基因,包括原核基因和真核基因;原核基因可以在大腸桿菌中直接表達出來(lái),但是真核基因韓有內含子不能,大腸桿菌不能對mRNA進(jìn)行剪切,從而形成成熟的mRNA,所以真核基因一般以cDNA的形式在大腸桿菌表達系統中表達。此外還需提供大腸桿菌能識別的且能轉錄翻譯真核基因的元件。
3、表達宿主菌
直接采用大腸桿菌來(lái)進(jìn)行蛋白表達。當然了,宿主菌的選擇需要基于宿主細菌的特性和靶蛋白的特征來(lái)進(jìn)行。