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大腸桿菌表達系統作為最常用來(lái)進(jìn)行蛋白表達的五大系統之一，已經(jīng)算得上是非常成熟地表達系統了。相對其他系統而言，其遺傳背景清晰、操作簡(jiǎn)單、表達水平高、成本低、周期短等特點(diǎn)，使得其的使用非常的廣泛，重組蛋白表達也常常會(huì )使用到大腸桿菌。那么，您知道大腸桿菌表達重組蛋白時(shí)常常會(huì )遇到哪些問(wèn)題嗎?今天普健生物就和您具體聊聊。
1、為什么要用到大腸桿菌表達系統?它的優(yōu)勢有哪些?
我們之前說(shuō)到過(guò)，大腸桿菌繁殖速度快，大概20分鐘就能實(shí)現倍增，而且轉染率高;容易實(shí)現高密度培養，可以通過(guò)溫度來(lái)實(shí)現直接控制;
2、哪些方法可以去除蛋白標簽?
去除重組蛋白標簽的方法主要有兩種：酶消化法和化學(xué)裂解法。酶消化法其實(shí)就是利用腸激酶、凝血酶、煙草蝕刻病毒蛋白酶等去溢出蛋白標簽的方式，是現階段最常用的標簽去除方法?；瘜W(xué)裂解法他剛才用于融合伴侶蛋白的移除，使用范圍相對來(lái)說(shuō)要窄一些，但是勝在價(jià)格便宜;
3、所謂的最合適的表達宿主有哪些?
其實(shí)所的最合適的表達宿主需要結合實(shí)際情況以及蛋白需求來(lái)進(jìn)行選擇，成本投入不同、技術(shù)實(shí)力不同等選擇的宿主也是各不相同。重組蛋白原核表達最常采用BL21和K-12來(lái)作為表達宿主;
4、為什么會(huì )出現低表達甚至無(wú)表達?
誘導前后蛋白純在毒素或者表達過(guò)程中密碼子有偏向性都會(huì )造成蛋白表達過(guò)低或是無(wú)表達的情況。我們可以通過(guò)控制本底表達水平、控制誘導表達水平、優(yōu)化質(zhì)粒DNA等方式來(lái)進(jìn)行調控;
5、蛋白包涵體形成的原因有哪些?
蛋白形成的過(guò)程中如果形成了不正確的二硫鍵、出現錯誤折疊、缺少翻譯后修飾等過(guò)程都可能會(huì )造成蛋白包涵體形成。我們可以通過(guò)表達分子伴侶、移除誘導劑、低溫誘導表達、改變融合伴侶蛋白、該表表達宿主等一系列的方式來(lái)解決這個(gè)問(wèn)題;
總的來(lái)說(shuō)，這些都是我們在操作中會(huì )出現的一些小問(wèn)題，但是，也恰恰是這些小問(wèn)題制約重組蛋白表達成功與否。所以，在進(jìn)行重組蛋白表達時(shí)，我們需要有專(zhuān)業(yè)的技術(shù)支持，用于解決各類(lèi)可能會(huì )在遇到的問(wèn)題。作為一家擁有十余年蛋白抗體制備經(jīng)驗的公司來(lái)說(shuō)，普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)的蛋白抗體制備服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。
