如何在大腸桿菌表達系統中實(shí)現高通量表達

　　在生物技術(shù)發(fā)展的今天，蛋白表達在科學(xué)研究以及臨床治療中起著(zhù)非常重要的作用。而在基因技術(shù)發(fā)展的今天，蛋白的需求日益增加，大腸桿菌表達系統因為其遺傳背景清晰、成本低以及生長(cháng)迅速的優(yōu)勢，使得其成為重組蛋白表達的首選。

　　什么是高通量蛋白表達技術(shù)?

　　高通量蛋白表達技術(shù)其實(shí)就是一種能夠實(shí)現大規模、高效的制備蛋白的技術(shù)，可以通過(guò)不同的方法來(lái)實(shí)現目標蛋白的表達。

　　高通量蛋白表達的步驟有哪些?

　　1、目的基因制備

　　作為蛋白表達，基因制備是第一步。目的基因的提取方法有很多，傳統的方法主要是通過(guò)從cDNA文庫中提取。但是，這種方法存在一定的局限性，費時(shí)費力，而且難以添加融合標簽?，F階段常用的方法主要采用PCR技術(shù)，設計好引物后，即可在PCR儀中完成目的基因的提取;

　　2、高通量表達系統構建

　　和傳統的蛋白表達系統構建相似，高通量蛋白表達系統的構建沒(méi)有特別大的改動(dòng)，只是說(shuō)在一些細節方面有著(zhù)一定的不同。比如在目的基因轉錄和表達之前需要添加融合標簽，以便于提升其表達效率;

　　3、菌株培養

　　在表達系統構建成功后(一般來(lái)說(shuō)，我們會(huì )選擇大腸桿菌菌株來(lái)進(jìn)行表達)，而后選擇出合適的菌株。當然了，對于大腸桿菌的培養來(lái)說(shuō)，我們盡量選擇分批培養，這樣才更加有利于菌株的控制;

　　4、高通量蛋白表達及純化

　　采用高通量的平臺，能夠實(shí)現迅速地進(jìn)行基因克隆、挑選菌落、質(zhì)粒分離、蛋白表達以及蛋白純化等操作。當然了，雖然說(shuō)這個(gè)平臺的構建相對困難，但是，對于那些復雜的分子實(shí)驗來(lái)說(shuō)，往往能提供極大的便利;

　　采用大腸桿菌表達系統來(lái)實(shí)現高通量重組蛋白的表達，能夠在極大程度上推進(jìn)蛋白的表達進(jìn)程。雖然說(shuō)在其技術(shù)水平上有著(zhù)一定的要求，但是隨著(zhù)技術(shù)的不斷優(yōu)化和創(chuàng )新，能夠讓其更加高效且可靠的進(jìn)行蛋白表達。