聯(lián)系我們
大腸桿菌是最早用來(lái)表達重組蛋白的第一個(gè)宿主，因為其成本低、效率高、遺傳背景清晰等特點(diǎn)，使得其在實(shí)驗室中使用非常的廣泛。但是，對于很多人來(lái)說(shuō)，想要完美實(shí)現大腸桿菌原核蛋白表達相對來(lái)說(shuō)也是非常困難的。有鑒于此，普健生物在這里和大家具體聊聊有關(guān)原核細胞表達的常見(jiàn)問(wèn)題。
問(wèn)題一：什么情況下選擇大腸桿菌表達系統
大腸桿菌表達系統是最常見(jiàn)的表達系統之一，優(yōu)點(diǎn)是遺傳背景清晰、成本低、表帶量高等，缺點(diǎn)是容易形成包涵體以及無(wú)法進(jìn)行表達后修飾。所以，這個(gè)表達系統更適合用來(lái)進(jìn)行原核表達不需要后期修飾的蛋白，特別是小分子蛋白;
問(wèn)題二：如何形成二硫鍵
未改造的大腸桿菌形成二硫鍵的能力相對要差一些，需要有針對性地對二硫鍵形成進(jìn)行改造，提升其表達能力;
問(wèn)題三：大腸桿菌的表達載體有哪些
用于大腸桿菌表達的載體較多，常用的有pET系列、pGEX系列、pCold系列等;
問(wèn)題四：如何實(shí)現大腸桿菌的分泌表達
大腸桿菌擁有一套特殊的分泌機制，通過(guò)外分泌信號將蛋白富集到培養基中，但是由于其細胞壁較厚，使得分泌所得的蛋白量較低;
問(wèn)題五：為什么會(huì )形成包涵體
原核表達常常會(huì )因為蛋白的錯誤折疊或過(guò)快表達而形成包涵體，主要原因是因為：目標產(chǎn)物本身性質(zhì)不合、宿主體系不合以及表達條件不合等原因;
問(wèn)題六：原核表達如何實(shí)現蛋白純化
原核表達蛋白純化的方式主要有親和層析、離子交換、凝膠排阻層析等;
問(wèn)題七：去除信號肽會(huì )不會(huì )影響蛋白表達
原核表達真核蛋白時(shí)信號肽是一定要去除的，這個(gè)方法在大腸桿菌中可行;
問(wèn)題八：如何提升蛋白的可溶性
原核大量表達時(shí)，很容易形成包涵體，可以通過(guò)選擇促溶標簽、篩選合適宿主菌、改變培養誘導條件等方法提升其可溶性;
總的來(lái)說(shuō)，大腸桿菌原核蛋白表達過(guò)程中需要注意的事項還是比較多的，但是相比其他技術(shù)來(lái)說(shuō)，其技術(shù)條件相對成熟，操作也更加方便。當然了，對于一些特殊表達，大腸桿菌可能不合適，這個(gè)時(shí)候就需要挑選一個(gè)更加合適的表達方法了。普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供大腸桿菌原核表達服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。
