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一、概述
兔單抗與傳統的雜交瘤鼠單抗相比具有更好的抗原識別功能。由于兔骨髓瘤細胞株受專(zhuān)利保護，無(wú)法利用雜交瘤技術(shù)開(kāi)發(fā)兔單抗，普健生物建立了噬菌體展示抗體文庫技術(shù)平臺以及新型的Xten™ Mab Single B兔單克隆抗體開(kāi)發(fā)技術(shù)平臺。
單個(gè)B細胞抗體制備技術(shù)是近年來(lái)新發(fā)展的一類(lèi)快速制備單克隆抗體的技術(shù)，是根據每一個(gè)B細胞只含有一個(gè)功能性重鏈可變區DNA序列和一個(gè)輕鏈可變區DNA序列，以及每一個(gè)B細胞只產(chǎn)生一種特異性抗體的特性，從免疫動(dòng)物脾組織或外周血中分離抗原特異性B細胞，通過(guò)單細胞PCR技術(shù)從分泌抗體的單個(gè)B細胞中擴增IgG重鏈和輕鏈可變區基因，然后在哺乳動(dòng)物細胞內表達并獲得具有生物活性的單克隆抗體。
圖1. XtenTM Mab 兔單克隆抗體開(kāi)發(fā)流程
二、服務(wù)內容
| 服務(wù)項目 | 客戶(hù)提供 | 服務(wù)內容 | 服務(wù)周期 | 交付內容 |
| XtenTM Mab 兔單克隆抗體開(kāi)發(fā) | 抗原序列 |
抗原制備 動(dòng)物免疫 脾細胞分離及陽(yáng)性B細胞篩選 陽(yáng)性克隆抗體可變區擴增及測序分析 重組抗體表達及純化 |
12周 |
100µg/株單抗 pUC質(zhì)粒 3株最優(yōu)的抗體序列 技術(shù)服務(wù)報告 |
案例展示：
利用兔單B 抗體技術(shù)開(kāi)發(fā)Anti-human CD86 兔單抗。選取血清效價(jià)大于128K 的兔子，分離PBMC細胞進(jìn)行流式分選， 獲得human CD86抗原特異性B細胞鋪板。
圖1 兔單B 細胞流式分選結果
使用普健生物XtenCHO高密度瞬轉表達系統，體外重組表達部分陽(yáng)性克隆抗體，純化后進(jìn)行功能驗證。
圖2 兔單抗重組表達分析
純化后的抗體進(jìn)行IF及內源WB 驗證。IF結果顯示抗體靈敏度高，抗原定位正確;內源WB 結果顯示，主帶明顯，無(wú)非特異性結合條帶。
圖3 Anti-human CD86 兔單抗IF 檢測結果
RAJI細胞，一抗1:50，二抗1:50， 曝光時(shí)間30ms
圖4 Anti-human CD86 兔單抗內源WB分析
Lane 1: Daudi cell lysate ;Lane2: Raji cell lysate.
