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抗體測序，其實(shí)就是對抗體蛋白進(jìn)行從頭到尾的一次序列測試工作，它廣泛應用于基因組序列、外顯子序列、DNA甲基化序列以及RNA轉錄組序列。在我們進(jìn)行單克隆抗體生產(chǎn)的時(shí)候，就常常會(huì )使用抗體測序技術(shù)，可以說(shuō)，雜交瘤技術(shù)是目前抗體測序技術(shù)會(huì )用最廣泛且最成熟的一個(gè)平臺。
什么是抗體測序技術(shù)?
其實(shí)抗體測序技術(shù)的原理和我們上面說(shuō)的一樣，就是通過(guò)對抗體蛋白進(jìn)行從頭到尾的測序。通過(guò)多酶解技術(shù)，通過(guò)高分辨率質(zhì)譜和獨特的數據分析的方式來(lái)進(jìn)行相關(guān)序列的檢測。其原理為通過(guò)測量串聯(lián)質(zhì)譜中兩個(gè)片段離子之間的質(zhì)量差來(lái)確定蛋白氨基酸殘基的質(zhì)量，然后沿著(zhù)蛋白的主鏈來(lái)確定每個(gè)氨基酸，最終得到氨基酸的完整序列的方式。
抗體測序的主要流程是什么?
1、全序列覆蓋
在通過(guò)如上方法進(jìn)行抗體測序的時(shí)候，需要確保每個(gè)點(diǎn)位的氨基酸有超過(guò)10中不同的肽段支持，在對氨基酸進(jìn)行質(zhì)量控制，確保每個(gè)質(zhì)譜里都有強離子片段峰證據。這樣，才能保證其全序列覆蓋;
2、抗體質(zhì)量核對
對輕重鏈進(jìn)行質(zhì)量測定，確保其在范圍內，以確保組裝的抗體序列;
3、亮氨酸和異亮氨基酸確定
亮氨酸和異亮氨酸的殘基通常是無(wú)法區分的，但是卻又容易造成其親和力出現偏差的情況。所以，我們在進(jìn)行相關(guān)測試的時(shí)候，可以使用一種集成的策略，通過(guò)同源性數據統計的方式，明確區分亮氨酸和異亮氨酸;
其實(shí)抗體測序的原理并不復雜，但是，很多用戶(hù)在自行進(jìn)行相關(guān)測序的時(shí)候，往往會(huì )出現這樣或那樣的問(wèn)題，最終造成結果偏差的情況?？偟膩?lái)說(shuō)，主要是一些細節方面的問(wèn)題，只要將這些方面的做好，測序則完全不是問(wèn)題。普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供抗體制備、蛋白表達以及抗體測序服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。
