聯(lián)系我們
對于新手來(lái)說(shuō)，昆蟲(chóng)細胞蛋白表達中常常會(huì )遇到各種各樣的問(wèn)題，這些問(wèn)題在看前輩們做實(shí)驗的時(shí)候完全感覺(jué)不到，可是當自己親自操作的時(shí)候，往往就會(huì )浮現。那么，昆蟲(chóng)細胞蛋白表達中一般會(huì )遇到哪些問(wèn)題呢?今天普健生物就和大家具體聊聊。
1、哪類(lèi)蛋白適合選擇昆蟲(chóng)蛋白表達?
對于一些表達相對困難的蛋白都可以考慮用昆蟲(chóng)來(lái)表達，比如：激酶、昆蟲(chóng)來(lái)源蛋白、糖蛋白、衣殼蛋白、膜蛋白等;
2、昆蟲(chóng)蛋白表達是用昆蟲(chóng)嗎?
昆蟲(chóng)表達并非用昆蟲(chóng)來(lái)表達，而是通過(guò)培養昆蟲(chóng)細胞，用細胞來(lái)表達蛋白;
3、目的基因是否整合到昆蟲(chóng)細胞基因中?
昆蟲(chóng)表達并不會(huì )將目的基因整合到昆蟲(chóng)基因中，而是在特定的條件下，用桿狀病毒攜帶目的基因去侵染昆蟲(chóng)細胞，而后利用宿主的環(huán)境進(jìn)行自我復制，從而獲得相應蛋白;
4、昆蟲(chóng)蛋白表達是否對蛋白大小有要求?
對于大小在10kd-100kd的蛋白適合于任何表達系統，110dk-250kd這類(lèi)大蛋白則首選昆蟲(chóng)表達系統;
5、衣殼蛋白表達后如何純化?
一般來(lái)說(shuō)，衣殼蛋白都較難純化，主要是因為其可溶性不好、不掛柱、容易形成聚合體等問(wèn)題。我們通常會(huì )采用多種純化方式來(lái)進(jìn)行綜合提純，這樣才能在一定程度上達到純化的目的;
6、目的蛋白表達后會(huì )和病毒一起釋放出來(lái)嗎?
目的蛋白是否會(huì )釋放到細胞外主要由蛋白的特性決定，當然了，信號肽也在一定程度上有著(zhù)一定的影響，一般來(lái)說(shuō)，蛋白都會(huì )釋放到細胞外。當然了，有一些特殊情況，需要特殊對待;
7、如何保存蛋白?
一般來(lái)說(shuō)，為了保護其中的病毒，我們需要加入2%培養基級別的BS或胎牛血清，在4度或負80度的環(huán)境中保存;
事實(shí)上能夠影響到蛋白特性的因素有很多，而且不同的蛋白所需環(huán)境也是各不相同的。所以，我們在進(jìn)行相關(guān)蛋白實(shí)驗的時(shí)候，需要結合實(shí)際情況來(lái)進(jìn)行選擇。武漢普健生物作為一家專(zhuān)業(yè)的蛋白制備公司，專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供昆蟲(chóng)蛋白表達服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。
