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在單克隆抗體制備的方法中，雜交瘤技術(shù)的使用是非常頻繁的。雜交瘤技術(shù)是在體細胞融合技術(shù)上發(fā)展起來(lái)的一種技術(shù)，它通過(guò)將免疫動(dòng)物細胞的脾細胞與骨髓瘤細胞相融合，所得細胞不僅能夠實(shí)現體外連續傳代，更是能持續性制備抗體。
雜交瘤技術(shù)的原理：
雜交瘤技術(shù)的基本原理是通過(guò)將兩種細胞融合，讓融合所得的細胞能夠同時(shí)擁有兩者的特征。而我們常說(shuō)的雜交瘤抗體制備技術(shù)是通過(guò)將經(jīng)過(guò)免疫的小鼠脾細胞和骨髓瘤細胞，所得細胞既具備抗體分泌功能，更是能夠實(shí)現體外連續培養，具備所謂的永久性。
雜交瘤技術(shù)的步驟：
1、選擇合適的細胞并進(jìn)行融合
我們知道，脾臟是B細胞聚集的重要場(chǎng)所，也就是說(shuō)，只要我們對機體進(jìn)行刺激，在脾臟內都會(huì )出現明顯的抗體應答。所以，我們可以通過(guò)在脾臟中提取免疫應答后的B細胞，并將其與骨髓瘤細胞相融合，而后加入細胞融合劑促使兩種細胞相融合;
2、選擇合適的培養基
細胞的融合是一個(gè)隨機的過(guò)程，融合后的細胞可能是脾細胞與脾細胞、脾細胞與B細胞、B細胞與B細胞、未融合的脾細胞、未融合的B細胞以及細胞的多聚體等。結合細胞融合所需的營(yíng)養選擇合適的培養基，通過(guò)5-7天的培養后，多聚體和未融合的細胞會(huì )自動(dòng)篩除。而后，我們再將融合后的雜交瘤細胞篩選出來(lái)即可;
3、細胞篩選及稀釋
細胞的篩選主要分為兩步來(lái)進(jìn)行，第一步是融合細胞的篩選，將成功融合的細胞從混合物種篩選出來(lái)。第二步是特異性篩選，將能夠產(chǎn)生我們所需抗體的細胞進(jìn)行特異性篩選;
而后，將篩選出來(lái)的融合細胞進(jìn)行充分稀釋?zhuān)⒎峙涞脚囵B板上，保證每個(gè)空中至少有數個(gè)細胞(這一過(guò)程也被稱(chēng)為克隆化)。而后，在將這些陽(yáng)細胞進(jìn)行再次克隆化，然后再利用其特異性篩選出合適的細胞。而后對所得細胞進(jìn)行增殖、凍存;
雜交瘤細胞技術(shù)作為單克隆抗體制備的重要手段，所得抗體無(wú)論在質(zhì)量還是數量上都有著(zhù)極大的優(yōu)勢。雖然說(shuō)隨著(zhù)技術(shù)的不斷發(fā)展，各種全新的技術(shù)也應運而生，但是雜交瘤細胞技術(shù)依然是現階段使用非常廣泛的方式之一，而且隨著(zhù)技術(shù)的不斷完善，相信未來(lái)的使用會(huì )變得更加的廣泛。武漢普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供單克隆抗體制備服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。
