重組蛋白之蛋白純化的原理與步驟

　　在重組蛋白表達完成之后，最主要的一個(gè)步驟就是蛋白純化，只有通過(guò)純化后的蛋白才能投入下一輪的使用中，否則，很容易對后期的使用產(chǎn)生影響。蛋白純化需要從復雜的混合物之中將目的蛋白提取出來(lái)，而且需要保持抗體的結構和功能。因此，了解蛋白純化的原理和過(guò)程就顯得尤為重要了。在本文中，普健生物將和大家詳細地介紹一下重組蛋白制備時(shí)蛋白純化的具體過(guò)程。

　　蛋白純化的原理：

　　蛋白純化在生物工程中是一項非常常用的技術(shù)，能夠有效提升目的蛋白的純度，對后期的使用和檢測都有著(zhù)非常好的促進(jìn)作用。蛋白純化需要結合樣本以及雜質(zhì)的特性來(lái)選擇合適的方法，既要保證過(guò)程的簡(jiǎn)單，又要不對蛋白的特性造成影響。

　　當然了，對于純度要求較高的實(shí)驗來(lái)說(shuō)，需要在常用純化方法中添加一個(gè)例子交換或疏水作用色譜的中間步驟。

　　需要注意的是，在蛋白純化的過(guò)程中，盡量選擇哪些步驟少的純化方式，因為每多一個(gè)步驟都會(huì )在一定程度上降低蛋白的產(chǎn)出量。

　　蛋白純化的步驟：

　　1、樣品準備。在準備好所有設備及耗材后，對目的蛋白進(jìn)行預處理，去除雜質(zhì)、組織、脂肪等，保證樣品的生物活性;

　　2、準備好純化柱。將純化柱固定好，并打開(kāi)封蓋;

　　3、樣品加載。將樣品從純化柱底部接入引流管，并將樣品導入純化柱內部;

　　4、洗脫。將純化柱內充滿(mǎn)樣品后，對其進(jìn)行洗脫。比如使用乙醇將雜質(zhì)和緩沖液沖洗掉;

　　6、再生及使用。根據需要對純化柱進(jìn)行再生，恢復其功能，以便于下一次使用;

　　7、收集及檢測。對收集所得上清液和洗脫液，并對所得樣品進(jìn)行檢測，評估出目的蛋白純度;

　　當然了，如上的重組蛋白蛋白純化方法為一般蛋白純化流程，具體的蛋白純化需要根據蛋白的性質(zhì)和需求來(lái)進(jìn)行改變，雖然說(shuō)大體過(guò)程相同，但是一些細節操作方面有著(zhù)一定的不同。在實(shí)際操作中，還需要控制好實(shí)驗的精確性，這樣才能在更大程度上保證蛋白的完整度和生活活性。武漢普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供重組蛋白純化操作，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。