重組蛋白表達在現代生命科學(xué)研究中起著(zhù)至關(guān)重要的作用,通過(guò)DNA重組技術(shù)來(lái)產(chǎn)生所需目的蛋白的方式。而對于重組蛋白表達來(lái)說(shuō),表達載體是基因表達所需的必要元素,比如啟動(dòng)子、序列、終止密碼子、轉錄終止序列等。就目前來(lái)說(shuō),有多種表達系統選擇,比如大腸桿菌、昆蟲(chóng)細胞、哺乳動(dòng)物、枯草芽孢桿菌以及酵母表達系統,需要結合不同情況來(lái)選擇載體。
那么,我們具體通過(guò)哪些因素來(lái)選擇表達載體呢?
1、表達系統
對于不同表達系統來(lái)說(shuō),其選擇的載體是各不相同的,所以,需要結合不同的系統來(lái)選擇合適的載體;
2、載體大小
一般這個(gè)時(shí)候,我們需要結合DNA片段是大還是小,為了操作方便,我們一般采用載體相對較小的分子,這樣所得的蛋白更穩定;
3、蛋白標簽
蛋白標簽我們一般選擇較短的肽段,只有有了這類(lèi)標簽,對于那些缺乏檢測方法的蛋白來(lái)說(shuō),能夠輕松實(shí)現檢測;
4、蛋白應用
根據目標蛋白的下游應用,表達載體可以搭配一些標簽使用,這些特定的標簽有助于研究目的蛋白的特性,以及蛋白之間的相互作用;
5、啟動(dòng)子
啟動(dòng)子的類(lèi)型有很多,它在很大情況下制約著(zhù)蛋白的表達。所以,無(wú)論是原核表達還是真核表達,我們都需要結合蛋白的特性及使用目的來(lái)挑選合適的啟動(dòng)子,這樣才能更好地進(jìn)行蛋白的表達;
6、標記選擇
標記其實(shí)就是一種基因,她可以為目的蛋白添加一種適合人工選擇的性狀。這種標記多選擇康生物基因,主要目的是方便后期的陽(yáng)性克隆篩選;
重組蛋白表達的作用不僅于此,其使用范圍非常的廣泛,當然了,對于不同的表達環(huán)境來(lái)說(shuō),需要結合不同的表達載體來(lái)進(jìn)行表達。在重組蛋白表達的過(guò)程中,有很多細節問(wèn)題需要注意,這樣才能更好地實(shí)現表達。更多重組蛋白表達,敬請關(guān)注普健生物。