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重組蛋白表達過(guò)程中，合適的技術(shù)路線(xiàn)會(huì )讓整個(gè)實(shí)驗過(guò)程事半功倍，雖然說(shuō)，經(jīng)過(guò)多年的發(fā)展，技術(shù)已經(jīng)非常成熟了，但是，這也是一個(gè)非常依賴(lài)經(jīng)驗的技術(shù)。所以，對于一些新手來(lái)說(shuō)，在重組蛋白表達過(guò)程中，有很多需要注意的問(wèn)題。有鑒于此，普健生物在這里和大家具體聊聊有關(guān)重組蛋白表達和純化過(guò)程中常常會(huì )遇到的問(wèn)題。
1、蛋白不表達
蛋白不表達的原因有很多，一般來(lái)說(shuō)，大部分的都可以通過(guò)如下幾個(gè)方面來(lái)判斷。蛋白大?。阂话銇?lái)說(shuō)，小于10kd或大于100kd的蛋白都是比較難以表達的;表達菌株與質(zhì)粒是否配套;表達條件是否合適，比如誘導劑、溫度等;培養基選擇：對于不同的表達需求，需要搭配不同的培養基選擇;當然了，表達成功與否也和表達量太低或是降解太快有關(guān);
2、蛋白降解
在純化過(guò)程中，常常會(huì )因為蛋白降解而導致表達失敗。一般是因為細菌本身的蛋白酶所有引起的，所以，需要全程添加蛋白酶抑制劑;
3、蛋白純度不高
蛋白純化過(guò)程時(shí)并不是每次都完美洗去雜質(zhì)，特別是鎳柱純化，雜蛋白較多，需要結合多種純化方式聯(lián)用;
4、條帶與預測不符
蛋白表達后常常會(huì )以多種狀態(tài)存在，因為電荷分布，會(huì )導致遷移速率有一定的變化，所以，會(huì )造成條帶偏移，復性后的蛋白會(huì )存在著(zhù)大小偏移的現象，而且翻譯后修飾也會(huì )造成條帶大小不一;
當然了，重組蛋白表達過(guò)程中會(huì )遇到的問(wèn)題有很多，無(wú)論是誘導溫度、濕度等方面的影響，以及各種抑制劑的添加，控制好細節方面的問(wèn)題才能保證蛋白的表達。在研究過(guò)程中遇到問(wèn)題，需要進(jìn)行大量的排查、試錯，這樣才能在面對一個(gè)全新蛋白時(shí)，更好地進(jìn)行控制。武漢普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供重組蛋白表達服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。
