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真核蛋白表達系統是我們比較常用的一種蛋白表達方式，它一般采用酵母、昆蟲(chóng)、哺乳動(dòng)物來(lái)進(jìn)行表達，所產(chǎn)生的蛋白和靶DNA具備高度的相似性，能夠誘導高效表達。但是其在實(shí)驗過(guò)程中的可誘導性、生物利用率、劑量依賴(lài)性等方面有著(zhù)較高的要求，所以，日常使用中需要權衡利弊后再來(lái)選擇。那么，在真核蛋白表達時(shí)，我們如何進(jìn)行蛋白純化呢?
其實(shí)我們知道，無(wú)論是原核表達還是真核表達都需要進(jìn)行蛋白純化，這樣才能提升蛋白的作用效果，使其達到我們的使用需求。所以，蛋白純化，是蛋白表達過(guò)程中非常重要的一個(gè)環(huán)節。
天然大分子蛋白純化：
通過(guò)蛋白特性，選擇合適孔徑的分子篩進(jìn)行純化，同時(shí)搭配陰離子柱或陽(yáng)離子柱，可以獲得純度高達95%的蛋白;
天然小分子分離純化：
通過(guò)分子篩過(guò)濾掉大部分的大分子，然后再使用大孔樹(shù)脂或反向樹(shù)脂純化小分子化合物，再通過(guò)HPLC和MS對小分子肽進(jìn)行篩選即可;
未知蛋白純化：
結合客戶(hù)提供的蛋白特性，選擇相對應的方法，最后采用質(zhì)譜鑒定，看是否滿(mǎn)足用戶(hù)的需求。一般來(lái)說(shuō)，對于這種未知的蛋白質(zhì)，我們所采用的方法也不外乎如上兩種，或者結合使用的方式;
真核蛋白純化前客戶(hù)需要提供哪些支持?
1、基因序列。為了更好地制備蛋白，客戶(hù)需要提供準確的基因序列，并告知蛋白標簽及相關(guān)要求，同時(shí)告知蛋白的用途(一般來(lái)說(shuō)，制備的蛋白僅供研發(fā)使用，不適用于臨床使用);
2、提供質(zhì)粒?？蛻?hù)需提供質(zhì)粒，且量不小于100ng，同時(shí)提供序列文件;
3、根據實(shí)驗要求，蛋白序列、分子量、等電點(diǎn)等信息;
真核蛋白表達系統雖然說(shuō)獲得的蛋白特性更強、效果更好，但是相關(guān)投入以及技術(shù)需求就不是原核蛋白表達系統所能比擬的。當然了，在蛋白制備完成后，所用的蛋白純化方法較為類(lèi)似，可以采用類(lèi)似的方法。普健生物專(zhuān)業(yè)為您提供真核蛋白表達及蛋白純化服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。
