蛋白純化的操作原理及其注意事項有哪些?

　　蛋白制備完成后，我們需要對其進(jìn)行純化以便于提升其各方面的性質(zhì)。那么，如何進(jìn)行蛋白純化呢?一般來(lái)說(shuō)，通過(guò)分子的大小、蛋白性質(zhì)以及外部環(huán)境等方面的不同，對蛋白進(jìn)行純化。下面，普健生物具體和大家聊聊有關(guān)抗體純化的常用原理。

　　1、分子大小

　　對于不同的蛋白來(lái)說(shuō)，其分子大小也是各不相同的。所以，我們可以結合不同分子的大小，通過(guò)透析、超濾、離心分離等一系列的手段進(jìn)行蛋白純化操作;

　　2、分子形狀

　　蛋白分子在離心通過(guò)溶液時(shí)，在通過(guò)膜、凝膠等填充材料時(shí)，都會(huì )受到分子影響。所以，對于不同形狀的蛋白分子來(lái)說(shuō)，可以利用這個(gè)方式來(lái)進(jìn)行純化;

　　3、蛋白溶解度

　　影響到蛋白溶解度的外界因素有很多，比如PH值、離子強度、溫度等，都會(huì )在一定程度上影響到蛋白的溶解度。所以，通過(guò)調節PH值、溫度等一系列的外界環(huán)境，提升蛋白濃度;

　　4、疏水性

　　對于不同的蛋白來(lái)說(shuō)，其親疏水性是各不相同的，而后通過(guò)調整鹽水溶液濃度來(lái)析出蛋白;

　　5、蛋白穩定性

　　通過(guò)對熱穩定性以及酶解穩定性等方面的調整，從而對蛋白進(jìn)行純化;

　　蛋白純化過(guò)程中的常見(jiàn)問(wèn)題有哪些?

　　1、層析柱的壽命有多久?填料的使用次數不同和條件有異，操作過(guò)程一定要規范，就能夠保證層析柱狀態(tài)最佳;

　　2、柱子堵了、超壓如何處理?將柱子寫(xiě)下來(lái)，結合說(shuō)明書(shū)進(jìn)行相關(guān)操作;

　　3、如何去除核酸雜質(zhì)?核酸帶浮點(diǎn)，可以通過(guò)陽(yáng)離子柱上流，從而有效去除核酸;

　　4、柱子進(jìn)氣泡了怎么辦?一般來(lái)說(shuō)是因為溫度變化，我們可以用離子水或乙醇反響高速沖洗;

　　5、柱子有色素如何去除?結合填料的耐受情況，優(yōu)先選擇NaOH進(jìn)行清洗，也可以使用有機溶劑清洗，在嘗試酸，如果依然去除不掉，也可以選擇定期更換填料;

　　總的來(lái)說(shuō)，蛋白純化的操作相對來(lái)說(shuō)也沒(méi)那么困難，結合蛋白特性，在結合相關(guān)文獻，選擇最合適的蛋白純化方法。在純化的過(guò)程中，做好相應的細節過(guò)程，這樣才能獲得更加優(yōu)質(zhì)的蛋白產(chǎn)品。普健生物專(zhuān)業(yè)為您提供蛋白純化服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。