盤(pán)點(diǎn)蛋白純化的一些常用方法及步驟

　　蛋白純化是實(shí)驗中最重要的方式之一，它不僅能提升蛋白純度，保障實(shí)驗的順利進(jìn)行，而且能夠提升實(shí)驗的精度。所謂的蛋白純化其實(shí)就是依據生物學(xué)的特性(比如電荷、大小、親疏水等)，選擇出合適的方法，將蛋白從混合物中分離出來(lái)。下面，普健生物和大家具體聊聊有關(guān)蛋白純化的常用方法和步驟。

　　一、凝膠過(guò)濾層析法

　　原理：主要通過(guò)分子的大小進(jìn)行分離，利用不同孔徑的凝膠來(lái)過(guò)濾，從而將較大和較小蛋白分離開(kāi)來(lái);

　　具體步驟如下：

　　1、將混合物加入到凝膠柱中;

　　2、加入緩沖液對其進(jìn)行洗脫，將較大分子留下來(lái);

　　3、將大小適中的蛋白保留下來(lái);

　　4、而后通過(guò)添加洗脫緩沖液從凝膠柱中洗脫出來(lái);

　　二、親和層析法

　　原理：通過(guò)抗體親和力之間的不同來(lái)實(shí)現蛋白純化;

　　具體步驟如下：

　　1、將蛋白加入到含特異性結合配體的親和層析柱中;

　　2、讓抗體與配體之間進(jìn)行結合;

　　3、通過(guò)加入洗脫液將非特異性結合的組分洗脫出來(lái)，實(shí)現蛋白純化;

　　三、離子交換層析法

　　原理：通過(guò)抗體分子與離子交換柱之間的相互作用來(lái)實(shí)現純化;

　　具體步驟如下：

　　1、將混合物放入離子交換柱中;

　　2、加入緩沖液進(jìn)行洗脫;

　　3、通過(guò)抗體表面電荷不同，能夠保留在離子交換柱中;

　　4、而后通過(guò)洗脫液將其從交換柱中洗脫出來(lái);

　　四、逆向相色譜法

　　原理：利用目標抗體與逆向相色譜柱中親疏水基團之間的相互作用來(lái)實(shí)現純化;

　　具體步驟如下：

　　1、將混合物加入到平衡好的逆向相色譜柱中;

　　2、加入緩沖液進(jìn)行洗脫，讓疏水性較低的分子無(wú)法通過(guò)逆向相色譜柱中;

　　3、因為親疏水性不同，使得其保留在逆向相色譜柱中;

　　4、通過(guò)PH值、酸堿度等不同，將目標抗體從色譜柱中洗脫出來(lái);

　　其實(shí)大家不難看出，抗體純化在步驟上其實(shí)并不存在太大的區別，只是在吸附柱以及洗脫液上面有著(zhù)一定的區別，需要根據具體條件來(lái)具體調整。當然了，也需要有一定的技術(shù)支持。普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供蛋白純化服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。