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在我們進(jìn)行相應的蛋白制備工作時(shí)，表達成功可以說(shuō)是至關(guān)重要的，但是一些細節方面的工作如果做得好的話(huà)，下游實(shí)驗中應用起來(lái)會(huì )變得更方便。不僅僅能提升蛋白的水溶性，而且可以在極大程度上節約時(shí)間。具體操作，普健生物在下面和大家一一道來(lái)。
選擇正確的標簽可以說(shuō)是一項艱巨的任務(wù)，因為合適的標簽不僅能幫我們獲得可溶性蛋白，而且能夠方便我們純化的方案，且不會(huì )對后續的實(shí)驗造成影響。在這里，我們唯一需要擔心的事情就是那個(gè)標簽有助于目標蛋白的溶解、表達及純化，因為標簽本身是可以切除的，所以，不用擔心它會(huì )干擾到蛋白。
硬性蛋白可溶性的三個(gè)關(guān)鍵參數：
IPTG濃度
在不同濃度下，蛋白的特性是不一樣的。但是我們需要注意，不要改變細胞中蛋白的折疊功能。在日常實(shí)驗中，我們可以考慮多嘗試幾個(gè)不同的濃度，選擇一個(gè)最高可溶性蛋白的產(chǎn)量;
溫度
偶爾我們在37度的典型溫度下，通過(guò)生長(cháng)和誘導分離的方式來(lái)分離蛋白。當然了，我們也可以試試在較低溫度下進(jìn)行增強，比如嘗試30度、25度、18度等溫度下進(jìn)行誘導;
誘導時(shí)間
誘導時(shí)間并不是說(shuō)越長(cháng)越好，因為宿主細胞會(huì )對蛋白會(huì )造成一定的降解，毒蛋白更甚。所以，在誘導期間，我們需要隔幾個(gè)小時(shí)進(jìn)行取樣，并檢測蛋白的表達情況。一般來(lái)說(shuō)，37度時(shí)4小時(shí)最佳，30度5-6小時(shí)最佳，25度情況下可以允許過(guò)夜;
當然了，在正式投入使用之前，我們可以對其進(jìn)行預實(shí)驗，通過(guò)各種不同的實(shí)驗進(jìn)行測試，選擇一種最合適的方式來(lái)投入到后期的實(shí)驗中。當各種方法都無(wú)法達到預期時(shí)，我們可以考慮只表達一部分蛋白，或者選擇不同的表達系統來(lái)進(jìn)行表達，最后甚至可以考慮采用調整各種變性條件下的純化?？傊?，無(wú)論用什么辦法，達到自己的要求即可。更多蛋白表達方面的知識，敬請關(guān)注普健生物。
