普健生物-盤(pán)點(diǎn)提升蛋白表達成功率的幾個(gè)方法

　　在蛋白表達過(guò)程中出現失敗的情況是很正常的，有很多人天天泡論壇，天天做實(shí)驗，但是蛋白表達的成功率依然不是很高，這是為什么呢?采用哺乳動(dòng)物表達系統來(lái)表達蛋白，能夠客服修飾蛋白表達的問(wèn)題，而且能夠實(shí)現高度人源化，可用于結構、功能分析等。

　　哺乳動(dòng)物表達系統最常用的兩個(gè)方式是瞬時(shí)表達和穩定轉染。穩定轉染也就是我們常說(shuō)的穩定細胞系構建，表達原理就是將外源基因轉染到細胞染色體生，讓其可以長(cháng)期穩定地生產(chǎn)蛋白。雖然說(shuō)生產(chǎn)的蛋白質(zhì)量高且設計性強，但是，價(jià)格相對較高，周期長(cháng)，操作難度也相對較大。所以，我們常用瞬時(shí)轉染來(lái)進(jìn)行表達。

　　那么，如何提升瞬時(shí)表達的效率呢?

　　方法一：編碼優(yōu)化

　　根據應用設計出最佳編碼序列，同時(shí)為其選擇最合適的表達載體，這樣，就能在極大程度上提升蛋白表達的成功率。也就是說(shuō)，我們在開(kāi)始蛋白表達之前，使用密碼子優(yōu)化算法，計算出合適的編碼序列，這樣可以節約時(shí)間、精力和成本;

　　方法二：提升溶解液濃度

　　很多時(shí)候，我們用來(lái)溶解蛋白的溶液濃度相對較低，使得蛋白表達量低，所以，出現這種問(wèn)題的時(shí)候，我們可以考慮適當提升一下溶解液的濃度;

　　方法三：搭配融合伴侶

　　我們可以適當地在重組蛋白中添加短肽序列，也就是我們常說(shuō)的蛋白標簽。這種方法可以有效地提升蛋白的表達效率，而后再用酶切技術(shù)或者化學(xué)試劑去除掉標簽;

　　方法四：純化優(yōu)化

　　根據上下游蛋白需求和純度的不同，設計出不同的純化方法。比如蛋白表達量高，就可以考慮使用一步式親和純化。如果需要進(jìn)一步地純化，則可以進(jìn)行分子排阻色譜，如果在這個(gè)基礎上需要繼續純化的話(huà)，則可以考慮使用更高的純化方式;

　　總的來(lái)說(shuō)，通過(guò)如上的四種方法可以在極大程度上提升蛋白表達的效率及成功率，當然了，在日常實(shí)驗中，需要結合實(shí)際情況來(lái)選擇合適的方法。同時(shí)，我們在做實(shí)驗的時(shí)候，需要多注意一些細節方面的問(wèn)題，比如溫度控制、PH值等等，這些細節都做好了，就能夠在更大程度上保障實(shí)驗的成功率。更多蛋白表達的知識，敬請關(guān)注普健生物。