如何快速確定所表達重組蛋白的穩定性

　　在我們的細胞中，蛋白的生成和降解處于一種平衡的狀態(tài)，這也保證了細胞處于一種平衡狀態(tài)。如果想要細胞更高效的生成蛋白，我們就必須了解蛋白的半衰期。

　　其實(shí)我一直很好奇，細胞為什么要降解掉它辛辛苦苦生成出來(lái)的蛋白呢?其實(shí)，它的主要目的是清除其中已經(jīng)完成工作的蛋白，避免因為某種蛋白的作用而造成不良的影響。那么，蛋白的穩定性就成為制約我們生產(chǎn)蛋白的主要因素。如何檢測所表達重組蛋白的穩定性呢?今天普健生物就和大家具體介紹幾種方法。

　　1、脈沖追蹤

　　這是一種傳統追蹤蛋白并估算其穩定性的方法，需要處理放射性。通常我們會(huì )在短時(shí)間內放射性標記細胞，然后再蛋白動(dòng)力學(xué)過(guò)程中添加未標記的前體。隨著(zhù)舊蛋白的降解新蛋白被合成的同時(shí)，我們檢測樣品中的放射性，以此來(lái)確定蛋白的半衰期;

　　2、環(huán)己酰亞胺追蹤

　　這個(gè)方法相對脈沖追蹤要簡(jiǎn)單一些，不用脈沖追蹤和放射性使用，而是改為添加一種環(huán)己酰亞胺來(lái)一直蛋白的合成，而后再來(lái)評估目的蛋白隨時(shí)間的降解情況;

　　3、抑制劑使用

　　我們知道，細胞內蛋白降解主要有兩種途徑：蛋白酶體途徑和溶酶體途徑。通過(guò)一系列酶，將蛋白用泛素標記，讓其最終定向稱(chēng)為細胞蛋白酶復合體，然后我們通過(guò)觀(guān)察其降解情況來(lái)測定蛋白的半衰期。而溶酶體途徑則是通過(guò)藥物抑制蛋白酶復合體，然后再評估這種干預對蛋白表達的影響;

　　4、相關(guān)翻譯后修飾蛋白降解法

　　這個(gè)方法需要對了解目的蛋白的降解途徑，然后分析其標簽，看哪些標簽是必須的。而后，通過(guò)對標簽的觀(guān)察來(lái)查看蛋白的半衰期;

　　5、蛋白的泛素化動(dòng)力學(xué)

　　前面我們和大家聊過(guò)有關(guān)泛素化方面的知識，有需要可以通過(guò)“個(gè)性化修飾性抗體技術(shù)解讀之泛素化抗體”。檢測泛素化可以提供一個(gè)強有力的數據，目的蛋白很有可能稱(chēng)為蛋白酶體的靶點(diǎn)。然后用抗泛素蛋白抗體來(lái)評估其泛素化狀態(tài);

　　總的來(lái)說(shuō)，確定蛋白的半衰期的方法有很多，我們完全可以結合自身的需求以及實(shí)際情況來(lái)選最合適的方法。普健生物作為一家擁有15年蛋白抗體生產(chǎn)經(jīng)驗的企業(yè)，專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供單邊抗體制備服務(wù)，如果您有蛋白表達、抗體定制、抗體測序、抗體人源化等需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。