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在重組蛋白表達中，很多時(shí)候會(huì )出現因為一些原因或是誤操作導致蛋白表達失敗或蛋白性能達不到要求的情況。很多時(shí)候是因為一些細節操作方面的問(wèn)題，有些時(shí)候是因為重組蛋白設計方面的問(wèn)題，那么，到底是因為什么原因導致呢?有鑒于此，普健生物今天在這里和大家具體盤(pán)點(diǎn)一下有關(guān)重組蛋白表達過(guò)程中的一些常見(jiàn)問(wèn)題。
1、蛋白表達水平低
重組蛋白表達水平低可以說(shuō)是重組蛋白系列中最常見(jiàn)的一個(gè)問(wèn)題，因為蛋白人為干預程度較高，無(wú)法完全按照傳統蛋白表達條件進(jìn)行表達。引起這個(gè)情況的原因很多，比如啟動(dòng)子活性不足、轉錄過(guò)程阻塞、翻譯后修飾限制多等等。需要通過(guò)優(yōu)化啟動(dòng)子、培養條件、轉化條件、培養時(shí)間等多方面進(jìn)行綜合考慮;
2、目的蛋白形成包涵體
非天然蛋白會(huì )出現包涵體的情況也是重組蛋白表達過(guò)程中非常常見(jiàn)的問(wèn)題。當形成包涵體時(shí)，我們可以通過(guò)優(yōu)化培養條件、引入輔助蛋白等方式來(lái)解決這個(gè)問(wèn)題;
3、目標蛋白磷酸化或糖基化不足
重組蛋白在表達后常常需要對其進(jìn)行翻譯后修飾的操作(比如糖基化和磷酸化)，但是有的時(shí)候因為修飾程度不足，導致蛋白在功能和穩定性方面受到影響。我們可以通過(guò)優(yōu)化培養條件、引入合適的修飾基因以及選擇更好的進(jìn)化系統來(lái)解決問(wèn)題;
4、目標蛋白折疊和穩定性方面的問(wèn)題
目的蛋白折疊錯誤很容易出現蛋白失活或不穩定的現象，這個(gè)時(shí)候我們需要優(yōu)化載體構建以及純化策略的方式來(lái)解決問(wèn)題;
5、目標蛋白可溶性問(wèn)題
蛋白不可溶或可溶性低也是重組蛋白表達的常見(jiàn)問(wèn)題，主要表現在保存時(shí)出現聚集和結晶方面的問(wèn)題。我們可以通過(guò)優(yōu)化純化條件、使用功能蛋白穩定劑以及使蛋白緩慢結晶的方式來(lái)解決這個(gè)問(wèn)題;
重組蛋白表達在蛋白功能研究和醫藥生產(chǎn)方面有著(zhù)重要的意義，但是也因為其非天然蛋白的緣故，會(huì )遇到很多傳統蛋白表達所不會(huì )遇到的問(wèn)題，哺乳表達量低、包涵體形成等。這個(gè)時(shí)候，我們就需要通過(guò)優(yōu)化各種條件來(lái)滿(mǎn)足其表達的條件，這樣才能獲得質(zhì)量更好的蛋白。當然了，各個(gè)細節方面的操作也是非常重要的。武漢普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供重組蛋白表達服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。
