聯(lián)系我們
在進(jìn)行重組蛋白表達時(shí)，需要通過(guò)一定的技術(shù)手段將目的基因置入到宿主細胞內，這個(gè)過(guò)程我們稱(chēng)之為細胞轉染。前文中我們和大家介紹過(guò)細胞轉染的一些方法，比如物理介導法、生物介導法等(詳情可查看“什么是細胞轉染技術(shù)?盤(pán)點(diǎn)細胞轉染的原理及其的特點(diǎn)”)?？梢哉f(shuō)，細胞轉染成功與否直接關(guān)系到重組蛋白表達的成功。那么，細胞轉染時(shí)有哪些因素會(huì )影響到因素呢?
1、血清
血清會(huì )在一定程度上影響到蛋白的表達，比如DNA陽(yáng)離子脂質(zhì)體復合物形成時(shí)是不能包含血清的，而且血清也曾一度被認為會(huì )降低轉染效率，同時(shí)，對于那些對血清含量比較敏感的細胞，會(huì )在極大程度上影響到蛋白的表達;
2、抗生素
抗生素(青霉素、鏈霉素等)會(huì )在一定程度上影響到細胞轉染，有一些細胞會(huì )受到抗生素的影響，需要結合具體情況來(lái)選擇是否添加抗生素;
3、細胞狀態(tài)
細胞轉染的過(guò)程非常重要，一定不要急于求成，需要讓細胞保持在最佳狀態(tài)時(shí)再進(jìn)行轉染。一般來(lái)說(shuō)，除了細胞狀態(tài)外，還需要盡量保證不要用傳代太多次的細胞去做;
4、細胞鋪板密度
不同的細胞其最佳培養密度是各不相同的，需要結合細胞的類(lèi)型以及應用而異;
5、啟動(dòng)子選擇
想要獲得高轉染的活性細胞，和其所選擇的啟動(dòng)子相關(guān)性是非常高的。比如，CMV啟動(dòng)子在大多數細胞類(lèi)型中可以獲得較高表達活性;
6、DNA量
高質(zhì)量的DNA量對于高效表達可以說(shuō)是至關(guān)重要的，轉染的質(zhì)粒無(wú)論是在純度還是在濃度方面都有著(zhù)很高的需求;
總的來(lái)說(shuō)，影響到細胞轉染效率的因素是非常多的，都需要結合實(shí)際情況來(lái)進(jìn)行選擇。所以，我們除了按照實(shí)驗順序進(jìn)行轉染，同時(shí)調整好相應的轉染環(huán)境外，還需要主要好相應的細節問(wèn)題。武漢普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供蛋白表達服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。
