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    什么是細胞轉染技術(shù)?盤(pán)點(diǎn)細胞轉染的原理及其的特點(diǎn)

    發(fā)表時(shí)間:2023-03-08 訪(fǎng)問(wèn)次數:811

      細胞轉染技術(shù)在蛋白抗體制備的一種常用方法,而且隨著(zhù)技術(shù)的不斷發(fā)展,細胞轉染已經(jīng)成為研究和控制真核細胞基因功能的常用工具。而且在基因功能、基因調控等方面有著(zhù)廣泛的使用。那么,具體什么是細胞轉染技術(shù)?它的原理和特點(diǎn)都有哪些呢?今天普健生物就和大家具體聊聊。

      什么是細胞轉染技術(shù)?

      所謂的細胞轉染,其實(shí)就是將外源分子導入到真核細胞內,通過(guò)這些外源細胞來(lái)該表真核細胞內蛋白表達能力的一種技術(shù)。

      使用細胞轉染技術(shù)的目的是什么?

      細胞轉染的主要目的就是研究基因的功能和基因的產(chǎn)物,對細胞中的一些表達進(jìn)行抑制或增強,控制細胞內蛋白產(chǎn)生。

      轉染為什么分為瞬時(shí)轉染和穩定轉染?

      所謂的瞬時(shí)轉染和穩定轉染的主要區別其實(shí)就是其是否需要將外源核酸整合到宿主染色體上;

      瞬時(shí)轉染:不用將外源基因整合到宿主染色體中,通常這個(gè)情況只維持幾天,多用于啟動(dòng)子和其他調控元件的分析;

      穩定轉染:將外源基因整合到宿主染色體中,也可以作為一種游離體存在,通過(guò)一些選擇標記,從而得到穩定轉染的同源細胞系;

      那么,有哪些轉染方法及其應用呢?

      1、磷酸鈣法。通過(guò)磷酸鈣DNA復合物吸附細胞膜,通過(guò)細胞內吞,實(shí)現轉染。但是不適合用于原代細胞,雖然操作簡(jiǎn)便,但是重復性差;

      2、電穿孔法。通過(guò)高脈沖電壓破壞細胞膜電位,使得DNA通過(guò)膜小孔進(jìn)入。但是容易造成細胞死亡,DNA和細胞用量大,而且需要根據不同細胞的類(lèi)型進(jìn)行電穿孔實(shí)驗;

      3、陽(yáng)離子脂質(zhì)體法。通過(guò)將帶正點(diǎn)的脂質(zhì)體與核酸帶浮點(diǎn)的磷酸基團形成的復合物形成細胞內吞。這個(gè)方法適用性較廣,重復性好,但是轉染的時(shí)候需要去除血清,且轉染后細胞類(lèi)型變化較大;

      4、病毒介導法。通過(guò)侵染宿主的病毒將外源基因整合到染色體中。對于那些難轉染的細胞來(lái)說(shuō),這個(gè)方法非常合適,但是所攜帶的基因不宜太大,且細胞需處于分裂期;

      5、基因槍法。通過(guò)重金屬吸附DNA,將其用彈道射入細胞,使得其隨著(zhù)DNA在細胞內釋放、表達。使用范圍相對來(lái)說(shuō)較廣;

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