穩定細胞株構建過(guò)程中的一些常見(jiàn)問(wèn)題盤(pán)點(diǎn)

　　為了能夠實(shí)現蛋白的大規模生產(chǎn)，我們通常會(huì )選擇通過(guò)構建穩定細胞株的方式來(lái)實(shí)現。當然了，穩定細胞株構建的過(guò)程相對來(lái)說(shuō)復雜，而且中間會(huì )因為很多原因造成構建失敗。有鑒于此，普健生物專(zhuān)業(yè)為大家盤(pán)點(diǎn)一下有關(guān)穩定細胞株構建過(guò)程中的常見(jiàn)問(wèn)題。

　　1、是否需要進(jìn)行密碼子優(yōu)化

　　因為密碼子種類(lèi)多樣、數量差異等問(wèn)題，所以，密碼子優(yōu)化對穩定細胞株的構建有著(zhù)很大的作用，能夠大幅度提高目標蛋白的表達量;

　　2、如何選擇合適的啟動(dòng)子

　　對于大部分的啟動(dòng)子來(lái)說(shuō)，使用得當都能在大多數細胞中獲得高表達性。CMV、EF1A、CAG、CBh、SFFV等都屬于強啟動(dòng)子，可以作為穩定細胞株的啟動(dòng)子;

　　3、穩定細胞系培養體系

　　構建穩定細胞系時(shí)一般建議使用版抗性篩選濃度來(lái)維持細胞生長(cháng)，可添加葡萄糖來(lái)調節細胞代謝水平，維持細胞增殖;

　　4、標簽是放N端還是C端

　　這個(gè)需要結合實(shí)際情況來(lái)選擇，如果信號肽在N端，則將標簽放在C端;蛋白較小也放C端，純化中需要酶切標簽則推薦放N端;

　　5、是否需要構建穩轉敲除的細胞系

　　一般來(lái)說(shuō)，我們不建議敲除元件穩定持續的表達在細胞中，因為這個(gè)操作會(huì )在很大程度上影響細胞的狀態(tài);

　　穩定細胞株構建一般使用在蛋白大規模生產(chǎn)時(shí)，在構建過(guò)程中需要注意的問(wèn)題也不止如上幾樣，各個(gè)方面的細節操作也需要引起注意，而且需要有相應的技術(shù)支持。普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供穩定細胞株構建服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。