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在生物實(shí)驗中，我們在很多時(shí)候都要用到穩定細胞株構建技術(shù)，但是如果采用質(zhì)粒建系的話(huà)，不僅時(shí)間長(cháng)，而且成功率低，可能耗時(shí)半年都不一定能得到想要的結果。那么，怎么才能穩定構建細胞系，并獲得較好的結果呢?今天，普健生物就和大家具體聊聊。
穩定轉染，其實(shí)是相對瞬時(shí)轉染來(lái)說(shuō)的，就是將進(jìn)入細胞中的質(zhì)粒整合到細胞基因組中去，讓其隨著(zhù)細胞的分類(lèi)而不斷遺傳下去的方式。而瞬時(shí)轉染則會(huì )因為整合基因的概率非常低而以游離的形式存在。
什么時(shí)候需要使用到穩定細胞株構建呢?
1、需長(cháng)期研究目的蛋白時(shí)。對于那些需要長(cháng)期研究的目的蛋白來(lái)說(shuō)，不能存在太大的批次差，否則會(huì )造成實(shí)驗結果不準的情況，這個(gè)時(shí)候就需要構建細胞株來(lái)保證蛋白批次相同;
2、目的蛋白半衰期長(cháng)時(shí)。對于一些半衰期較長(cháng)的目的蛋白來(lái)說(shuō)，瞬時(shí)RNA只能達到干擾表達的目的，卻無(wú)法去除蛋白，這個(gè)還是可以用穩定細胞株來(lái)實(shí)現;
3、需極高拷貝數表達時(shí)。目的蛋白需要極高的拷貝數時(shí)，往往會(huì )因為一些認為的因素而導致結果不準確的情況，這個(gè)時(shí)候，就需要構建穩定細胞株來(lái)幫助實(shí)驗研究;
4、需用到誘導表達系時(shí)。主要針對一些致死基因或時(shí)空表達的情況;
5、需要使用到細胞時(shí)。比如裸鼠成瘤等atagenix;
構建穩定細胞株有哪些要點(diǎn)?
我們知道，穩定細胞株構建是一個(gè)長(cháng)期的過(guò)程，無(wú)論是質(zhì)粒構建，還是慢病毒包裝，以及細胞轉染和篩選，任何一個(gè)步驟都是至關(guān)重要的。甚至有的時(shí)候一個(gè)細胞株的構建就需要耗費半年的時(shí)間，只要一個(gè)步驟出錯，就會(huì )造成實(shí)驗的失敗。所以，除了注意各個(gè)步驟外，我們還需要做好如下三點(diǎn)：
1、優(yōu)良的細胞種子。
2、選擇形狀穩定的細胞。
3、選擇活力無(wú)損的細胞。
總的來(lái)說(shuō)，穩定細胞株不僅能降低成本，能夠減少污染，而且能夠有效地避免一些認為原因造成的影響，提升實(shí)驗結果精確度。雖然說(shuō)現階段的穩定細胞株構建有著(zhù)一定的局限性，但是，相信技術(shù)的發(fā)展下，未來(lái)一定能夠解決這些問(wèn)題。普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供穩定細胞株構建服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。
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