之前我們和大家聊過(guò)穩定細胞株篩選,其實(shí)就是從構建的穩定細胞株中挑選出穩定表達且目的蛋白質(zhì)量高的細胞株。今天,我們再和大家具體聊聊有關(guān)穩定細胞株構建的常用方法。
總共的來(lái)說(shuō),穩定細胞株因為技術(shù)實(shí)力、儀器、原材料以及需求不同,其構建方法也是各不相同的,不過(guò),常用的一些方法也大體相同。
1. 轉染:這是最常用的方法之一,通過(guò)將目標基因的表達載體導入到目標細胞中實(shí)現。
轉染的方法一般包括:化學(xué)轉染和病毒轉染兩種。
化學(xué)轉染:使用化學(xué)物質(zhì)(例如聚乙烯亞胺、磷脂體等)將表達載體引入細胞內。
病毒轉染:使用病毒作為介導體,將表達載體傳遞到細胞中。常用的病毒載體包括腺病毒、逆轉錄病毒和腺相關(guān)病毒等。
2.電穿孔:通過(guò)電脈沖的作用,在細胞膜上形成臨時(shí)的微孔,使表達載體得以進(jìn)入細胞。這種方法可以在不使用病毒或化學(xué)物質(zhì)的情況下實(shí)現轉染。
3.瞬時(shí)轉染:這種方法不涉及穩定細胞株的構建,而是將目標基因的表達載體短暫地導入細胞中,使其在一段時(shí)間內表達目標基因或蛋白質(zhì)。這可以用于快速評估目標基因的功能或進(jìn)行臨時(shí)的表達實(shí)驗。
在進(jìn)行穩定細胞株構建時(shí),我們常常會(huì )進(jìn)行相關(guān)的標記,以便于在轉染后期進(jìn)行相關(guān)的篩選工作,這樣,就能夠更加精確地讓我們獲得穩定細胞株。而且作為現階段使用相對廣泛的一種蛋白表達技術(shù),穩定細胞株的重要性是不言而喻的,而且隨著(zhù)技術(shù)的不斷發(fā)展,相信在不僅的將來(lái),其使用將會(huì )更加的廣泛。普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供穩定細胞株構建服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎來(lái)電咨詢(xún)。