前面我們和大家簡(jiǎn)單介紹了一下有關(guān)穩定細胞株篩選的步驟,讓大家對其有了一定的了解,那么,是不是就可以直接開(kāi)始實(shí)驗了呢?答案是否定的。在穩定細胞株篩選的過(guò)程中不僅有很多細節操作問(wèn)題,還有很多注意事項,稍不注意,就可能造成實(shí)驗的失敗。有鑒于此,普健生物今天在這里和大家具體聊聊其注意事項問(wèn)題。
1、篩選前的準備
篩選前我們需要確定藥物篩選的相關(guān)濃度。對于不同的細胞來(lái)說(shuō),其對藥物的敏感度是各不相同的,需要在細胞能夠承受的濃度范圍內,否則,很容易造成細胞表達低甚至死亡的情況;
2、篩選過(guò)程中的注意事項
篩選時(shí)間:一般在轉染后48小時(shí)后進(jìn)行,而對于慢病毒來(lái)說(shuō)加藥時(shí)間一般在72小時(shí);
空白對照:在加藥篩選時(shí),需要提前設置好空白對照,全程對比細胞的變化情況;
換液操作:當細胞死亡達到一定的程度后,需要及時(shí)換液,以避免有害物質(zhì)造成細胞的死亡;
3、克隆篩選過(guò)程中的注意事項
在進(jìn)行單克隆篩選的時(shí)候,如果有熒光標記,則盡量選擇那些帶有熒光較強的細胞;如果質(zhì)粒不帶熒光標記,則只能進(jìn)行盲挑。
當然了,無(wú)論是否帶有熒光標記,都需要對其進(jìn)行驗證,而且盡量多挑幾個(gè)來(lái)進(jìn)行克隆,以保證成功率;
當然了,如上所述也只是注意事項中的一部分,對于不同實(shí)驗的不同需求來(lái)說(shuō),注意事項也是各種各樣的,比如基礎的溫度、PH值等等,這些都需要提前了解好,而后根據相應的需求來(lái)配置相應的環(huán)境,這樣才能有效提升實(shí)驗的成功率。武漢普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供穩定細胞株篩選服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎來(lái)電咨詢(xún)。