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關(guān)于重組蛋白，相信一些有一點(diǎn)技術(shù)的公司都可以做表達出來(lái)，但是，如果想要將蛋白用于下游實(shí)驗，那么，成功表達的重組蛋白就顯得非常的重要了。蛋白并不是說(shuō)表達出來(lái)就行，而是需要為后續的實(shí)驗提供有效助力，如果在一開(kāi)始的時(shí)候就優(yōu)化了蛋白的可溶性，那么，后續的實(shí)驗將會(huì )得到極大的簡(jiǎn)化。因此，為重組蛋白選擇一款正確的標簽就顯得非常重要了。
常用的標簽中都有什么?
很多人對于“正確”這個(gè)詞有著(zhù)一定的誤解，只是覺(jué)得挑選一個(gè)標簽讓蛋白得以表達即可。其實(shí)不然，所選的標簽需要幫助我們獲得可溶性蛋白，不僅簡(jiǎn)化相應的蛋白純化方案，更是不會(huì )對后續實(shí)驗產(chǎn)生影響，甚至起到促進(jìn)作用。所以，對于那些具備多個(gè)切割位點(diǎn)的蛋白來(lái)說(shuō)，我們需要考慮的問(wèn)題就是蛋白的溶解、表達以及純化點(diǎn)是否可以切除，以及切除這個(gè)點(diǎn)是否會(huì )影響到后續目的蛋白的行為。
如何獲得可溶性蛋白?
對于重組蛋白來(lái)說(shuō)，它在真核細菌中表達時(shí)，最常見(jiàn)的問(wèn)題就是不溶。所以，想要使得其可溶性提升，需要結合如下三個(gè)方面來(lái)進(jìn)行考慮。
1、IPTG濃度
簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，就是控制好IPTG的濃度，可以嘗試多幾個(gè)不同的濃度，選擇一下，看哪個(gè)濃度能夠提供最高的可溶性蛋白濃度;
2、溫度
首先，我們選擇37度的典型溫度來(lái)進(jìn)行生長(cháng)和誘導分離，一般來(lái)說(shuō)，在更低的溫度下蛋白的表達程度更高。然后，我們可以分別嘗試在30度、25度、18度等條件下進(jìn)行誘導，選擇最佳誘導溫度后，再加入IPTG;
3、誘導時(shí)間
當然了，誘導的時(shí)間并非越長(cháng)越好，對于那些“有毒蛋白”顯得尤為明顯。一般來(lái)說(shuō)，我們在誘導時(shí)，選擇隔幾個(gè)小時(shí)取一次樣，并檢查目的蛋白的表達量;
當然了，如果通過(guò)如上這些手段都沒(méi)有達到我們的要求，那么，我們可以考慮通過(guò)只表達蛋白的一部分，或者選擇不同的表達系統來(lái)進(jìn)行表達，甚至保留目的蛋白的翻譯后修飾?？偟膩?lái)說(shuō)，通過(guò)多次的實(shí)驗總會(huì )獲得我們所需的重組蛋白。武漢普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供重組蛋白表達服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。
