聯(lián)系我們
重組蛋白表達實(shí)驗中，即便是完全按照自己設計的程序來(lái)操作，也可能會(huì )出現各種各樣的問(wèn)題，只要這些問(wèn)題出現，基本上就代表我們的實(shí)驗沒(méi)成功。其實(shí)，實(shí)驗做多了之后，這種問(wèn)題可以說(shuō)是非常的普遍。有鑒于此，普健生物就和大家總結一下有關(guān)重組蛋白表達過(guò)程中常見(jiàn)的一些表達異常的情況及其解決辦法。
1、密碼子位移。外源基因序列內部核糖體結合位點(diǎn)出現偏移，或者受到一些其他因素干擾，導致密碼子出現位移的情況;
2、稀有子密碼問(wèn)題。我們可以使用相關(guān)軟件對稀有子密碼進(jìn)行分析，在進(jìn)行重組表達之前，對蛋白序列進(jìn)行優(yōu)化。我們紙袋，在蛋白表達起始位點(diǎn)前的15個(gè)氨基酸密碼子至關(guān)重要，連續的兩個(gè)稀有子密碼可能會(huì )造成表達效率降低的情況。所以，我們可以通過(guò)對其進(jìn)行優(yōu)化，避免如上可能會(huì )出現的問(wèn)題后再進(jìn)行表達;
3、信號肽表達問(wèn)題。一般來(lái)說(shuō)，大腸桿菌缺乏加工蛋白信號肽的機制，所以，我們在進(jìn)行相關(guān)真核表達時(shí)候，需要引起額外的注意;
4、GC含量高問(wèn)題。一般來(lái)說(shuō)，基因序列中GC含量超過(guò)70%的時(shí)候，就很難進(jìn)行蛋白表達了，想要表達成功，我們只能進(jìn)行相關(guān)優(yōu)化工作，降低其中GC含量后再表達;
5、蛋白大小異常問(wèn)題。小于10KD或者大于100KD的蛋白都難以表達，如果遇到這種蛋白，可考慮使用其他辦法;
6、蛋白標簽選擇問(wèn)題。通常我們需要在蛋白表達中加入各種標簽，可一些標簽會(huì )影響蛋白表達，甚至造成蛋白表達不成功。這個(gè)時(shí)候，我們就需要考慮采用一些易于表達的標簽，不要選擇難以表達的標簽;
在重組蛋白表達的過(guò)程中，我們常常會(huì )遇到這樣或者那樣的問(wèn)題，一般來(lái)說(shuō)，我們只需要根據實(shí)驗的要求來(lái)進(jìn)行，都不會(huì )出現什么問(wèn)題。牢記如上的六點(diǎn)，在表達過(guò)程中多注意相關(guān)情況，相信蛋白表達失敗的概率不會(huì )太高。普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供重組蛋白表達服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。
